1、抗体芯片:
具有微型化、集成化、高通量的特点,可以用于检测某一特定的生理或病理过程相关蛋白的表达丰度,目前主要用于信号转导、蛋白组学、肿瘤及其他疾病的相关研究。
2、原理:
把能和不同抗原特异性结合的多种抗体高密度地固定到载体上,使待测样品通过芯片表面,经过洗脱把非特异性结合的蛋白洗掉,从而对特意性结合在上面的抗原进行检测。
3、抗体芯片的检测内容:
抗体芯片主要用于蛋白表达谱、蛋白质磷酸化及蛋白质相互作用等检测
A)蛋白表达谱
可检测一种样品的蛋白表达谱,也可检测两种不同样品间蛋白表达水平的相对差异,一次实验可比较出数百种蛋白(可多达500种)表达水平的变化,其样品可为细胞、组织或体液中提取的蛋白质,可以是总蛋白、胞浆蛋白、核蛋白或某种细胞器蛋白。
B)蛋白质翻译后加工(磷酸化水平改变)
可从几百种已知蛋白中快速筛选磷酸化水平发生改变的蛋白,蛋白质磷酸化是翻译后加工的主要类型,涉及许多重要细胞功能的改变,是蛋白质活性改变的标志,在信号转导研究中有重要意义。
C)蛋白质间相互作用
用于检测某一种蛋白与芯片上各种蛋白之间是否存在相互作用,如研究新基因及其编码的蛋白的功能时,需要鉴定出该新蛋白与其他已知蛋白之间的相互作用。
4、抗体芯片的应用领域
抗体芯片技术的主要应用是发现蛋白质新的功能、了解蛋白功能的分子机制、分析特定刺激因素激发的信号通路、筛选药物候选的效应分子和发现新的肿瘤生物标记物等。
a)抗体芯片在肿瘤及其它疾病研究中的应用
患者体内某些表达水平上调或下调及活性发生改变的蛋白都可能用于疾病诊断、监测、疗效评价或作为治疗的靶分子。因此,抗体芯片在研究疾病发展过程和寻找疾病标志物进行早期诊断以及新的治疗靶标选择等方面均有重要意义.
b)抗体芯片在信号转导研究中的应用
细胞内存在各种信号转导通路,各通路之间存在复杂的相互作用,形成网络,因此要进行较全面系统的信号转导的研究,必须采用高通量的技术手段。目前已有公司生产出专门用于信号转导研究的抗体芯片。
抗体芯片技术不仅能检测各种信号蛋白的表达,还能同时分析多种蛋白质与蛋白质问的相互作用,这点非常适用于推导分子网络和信号转导途径。Stoletov等用抗体芯片确定了10种可能与Rapl相互作用的蛋白质,包括Bmx非受体酪氨酸激酶,鉴定出Bmx是VEGF诱导内皮细胞活化的一种Rapl下游效应分子。
c)抗体芯片在蛋白质组学中的应用
蛋白质组学研究主要有两条技术路线:
一是通过二维电泳及质谱分析,二是通过抗体芯片进行研究。Wingren等[19]将数千种重组抗体印在芯片上,结合尚待检测的生物学样品如整个蛋白质组或任一分析物,其产生的芯片模式能转变为蛋白质组图谱或分子指纹,可揭示出蛋白质组的构成组分。
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