磁珠分选策略有哪些?
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美天旎磁珠分选策略分为:阳性分选、去除分选、先去除分选再阳性分选、多选分选、全血分选。好了,废话就不多说了,下面小编就带大家一一来了解下。
策略一:阳性分选
● 目的细胞被磁性标记后,作为阳性标记组分直接分选出来。
● 分选后的细胞不必去除MACS微珠,可立即用于培养或者后续操作。该方法可以将磁性标记的靶细胞富集10000倍。
● 阳性分选策略优点:纯度高,回收率高,操作迅速、简便。
图一:阳性分选示意图
策略二:去除分选 ● 去除分选是把非目的细胞磁性标记后从细胞混合物中去除的方法,即未磁性标记的细胞为目的细胞。
● MACS分选柱技术加上强磁性标记可以去除高达4个对数级的细胞。
● 去除分选策略适用范围:去除不需要的细胞;缺乏针对目的细胞的特异性抗体(如肿瘤细胞);不需要抗体和目的细胞结合,即细胞不被激惹(如T细胞、B细胞、NK细胞功能分析);复合分选的一部分。
图二:去除分选
策略三:先去除分选再阳性分选
● 细胞亚群的分选,可以先磁性标记非目的细胞,去除分选后对阴性组分再行磁性标记和阳性分选。
● 适用范围:在细胞悬液中,非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原,就需要先去除这群非目的细胞;如果要分选非常稀有细胞,先从细胞悬液中去除非目的细胞,在富集细胞的基础上,进行阳性分选,可获得高纯度目的细胞。
策略四:多重分选
● MACS多重分选是一种根据多种表面标志磁性分选细胞的技术。
● 多重分选中,首先用MACS多选微珠标记目的细胞,进行第一参数阳性分选。然后细胞与多选解离试剂共同孵育,后者可以将微珠从抗体上酶性解离下来。接着使用针对另一细胞表面标志的抗体-微珠复合物磁性标记阳性分选细胞。二次标记的细胞可以再次进行阳性分选或者去除分选。
图二:多重分选
策略五:全血分选 ● 从外周血中直接分选细胞,无需裂解红细胞,无需密度梯度李心,直接上柱分选。
图四:全血分选
最后小编为大家献上美天旎推出的新技术产品:REAlease磁分选技术
REAlease Microbeads是一类基于重组基因工程改造抗体而研发的新型磁分选产品,使用方便,磁珠和标记的抗体片段均可灵活去除。
特点一:抗体片段化,易去除:不再使用传统抗体,而是使用REAfinity抗体片段,降低抗体与细胞的亲和能力,易解离;
特点二:抗体片段多聚化,可高效识别细胞:低亲和力的抗体片段多聚化,形成抗体片段-生物素复合体,高效结合细胞;
特点三:标记均可去除:磁珠可去除、抗体可解离,因此,根据后续实验需求,分选到的目的细胞可以仅去除磁珠只保留抗体标记,也可以同时去除磁珠和抗体,细胞表面完全不带任何标记。
图五:REAlease磁分选技术原理图
只需简单四步,完成REAlease磁分选
步骤1:细胞标记:细胞先后被REAlease复合体(抗体片段-生物素)和抗生物素磁珠标记
步骤2:磁性分离:阳性细胞被滞留在梯度磁场中,阴性细胞自然流穿
步骤3:磁珠去除:用REAlease Bead Release磁珠解离试剂洗脱,在洗脱目的细胞的同时,磁珠与细胞分离,获得带抗体标记的目的细胞
步骤4:抗体标记去除*:用REAlease Release试剂处理细胞,将细胞表面的抗体复合物解离。(如果您需要直接对目的细胞进行流式检测,可以省略该步骤,利用细胞表面抗体标记直接检测目的细胞)
图六:REAlease磁分选步骤演示图
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