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WB/IP样本制备的事儿—优宁维&CST全国技术巡回讲座之总结，附视频操作

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草木繁盛，花儿娇艳，正值春暖花开之际，优宁维& Cell Signaling Technology (CST)公司全国技术巡回讲座也开始了，第一站沈阳，第二站济南，讲座主要就抗体相关操作技术和信号通路研究动态进行答疑解惑、交流探讨，许多老师表示启发很大，收获满满。其中一场：“Signaling Pathways and Key Regulators in Stem Cell & Developmental Biology”我们开启了直播模式，虽现场在沈阳，线上也异常火爆，全国各地也有很多的老师进来学习交流，观看回播可点：CST全国巡回讲座-干细胞与发育生物学相关信号通路与研究热点。这里务必要插播一条重要利好消息了：CST表观&发育生物学全线抗体以及CHIP试剂盒促销，覆盖范围广，1600多个货号，一直到今年7月31日止。做这个方向的老师点进来查看：（附上上次chip 表观遗传促销活动）

其中，两场主题WB和IP的技术讲座中，也收到一个比较普遍的一个问题，是实验得不到目标蛋白条带，怎么办？经过长期处理客户技术问题，我们发现，很多问题竟都是出在样本制备这一步，而抗体出现问题的比例极小。实验的第一步，样品制备至关重要！！！刚刚就遇到一例，老师WB实验得不到目的蛋白，我们第一时间申请到对应的阳性对照，阳性对照结果很好，才发现是样本制备问题。

做WB和IP的时候，一些抗体对实验条件尤其敏感，针对样本制备这部分，CST非常建议进行超声波处理细胞裂解物10-15秒保证细胞的完全裂解并打碎核染色质，这样可以减少样品的粘稠度，并且对检测膜结合蛋白和核蛋白非常重要。超声这一步需要实验室有一台带有探头的超声仪，推荐使用直径为3 mm的探头。长时间的超声过程产生的热量会导致样品变性或者降解，为了阻止样本过热，超声过程中需要将样品管放在冰浴中，每次超声处理一段时间后需要在冰上暂停一段时间，用来减少热量的产生，每次超声的时间也可以优化，更多高级的超声仪可以设置时间、强度、暂停时间、重复超声次数等参数并储存为程序，以实现自动超声。详细的推荐操作见上方视频（讲座过后借用的一台做了演示）。当然，如果没有探头超声仪，可以用细的注射器针头破碎样本，也可以破环细胞膜并切割核染色质。针头抽吸样品产生的机械压力，可以破碎细胞膜、细胞器和核蛋白复合物。首先，将样本用裂解液重悬后，先用粗一些的针头（如10ml注射器针头）进行多次吹吸，再换成更小的的针头继续吹吸，直到样品粘稠度明显下降，整个过程需要在冰上操作。

在这里预告一下：优宁维& Cell Signaling Technology (CST)公司全国技术巡回讲座会在5月份陆续走到天津(南开大学、天津医科大学、天津科技大学等）、郑州（河南省人民医院、郑州大学、郑州大学第一附属医院等）、新乡（新乡医学院）、开封（河南大学）、太原（山西大学、山西医科大学等）欢迎到场。悄悄透露，讲座除了带来技术盛宴，我们和CST也带了特别用心的礼品，为您的科研增添色彩。有讲座需要的老师请联系当地优宁维销售咨询时间、主题。

优宁维公司全国共30个办事处，遍布大江南北，有暂时走不到的城市，优宁维也提供小优博士在线课堂！下面是小优博士往期课堂回播/在线预约讲座的链接http://www.univ-bio.com/lectured.html祝大家研究顺利！

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