蛋白纯化入门宝典-5场蛋白纯化系列讲座盛大来袭
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暑期结束,食堂与实验室间的两点一线生活又将步入正轨,面对科研的一次次打击,每个星期是不是总有那么6,7天不想做实验? 对于纯化蛋白的新手小白,面对新的蛋白无从下手。质粒构建,菌体培养,蛋白纯化,一招不慎便会满盘皆输。
1、不知选择何种纯化方法?凝胶过滤,离子交换,亲和层析,疏水层析等分离方法是“八仙过海,各显神通”让人眼花缭乱。
2、如何依据蛋白选择合适的标签?诸如His标签,GST标签,MBP标签以及Strep标签等,选择的标签决定了该构建怎样的质粒。
3、标签是构建在蛋白的N端还是C端?标签位置也会影响蛋白的挂柱效果,此外对蛋白的活性也可能产生影响。
......
查阅的文献越多头越大,然而好不容易把质粒构建好了,菌体培养好了,却又在纯化过程中遇到诸多麻烦:
1、如何选择合适规格的层析柱,合适的填料?
2、选择怎样的洗脱液,浓度如何?
3、菌体超声及压力破碎效果不好;
4、无法纯化得到目的蛋白或蛋白回收率太低;
5、纯化的蛋白杂带较多怎么办?
6、蛋白浓缩后出现浑浊该如何解决?
7、蛋白易形成包涵体,随菌体碎片一起沉淀?
8、离子交换层析选择什么样的交换树脂,如何选择挂柱pH,洗脱pH?
9、标签蛋白无法挂柱,或者挂柱后洗脱不下来,怎么办?
......
天空飘来五个字,那都不是事,不要怕,小优来帮您!别忘了我们的口号,小优博士课堂,让您的科研不再难!
小优这次特别邀请了3位集颜值、才华于一身的GE资深产品科学家带着满满的干货来到小优课堂连续为大家带来5场蛋白纯化系列技术讲座,对四大纯化原理进行详细讲解,并对各层析方法的选择及实验中的常见问题进行解析,在线解答各位童鞋有关蛋白纯化的疑难问题。
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