CBA原理详细介绍

Cytometric Bead Array(CBA),即细胞因子微球检测技术。是一种基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法,它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。BD公司利用流式细胞仪可对荧光信号进行级数放大的特性,将受检的可溶性因子附着于一些具有近似细胞直径的微粒上,即可对受检样品中的各种可溶性因子进行检测。 CBA的基本原理近似于ELISA的检测,即利用微小、分散的颗粒捕获液体待测物,并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒——待测物复合体所散发的荧光,从而测定待测物的数量。


详细原理介绍

每个CBA微球大小一致,具有特定的荧光强度,包被有适用于特定分析(如其它抗体或者可溶性蛋白)的特异性捕获抗体(Capture Antibody),提供了类似ELISA孔板的捕获表面。当微球和待测样品溶液混合后,微球上的特异性抗体就与样品(血清、血浆或者细胞培养液)中相应的抗原或蛋白结合,然后加入荧光标记的检测抗体,就会形成“三明治”夹心复合物。最后通过流式细胞仪对特异性目的蛋白进行检测。CBA的每种微球携带有不同强度的红色荧光,在流式细胞仪的FL3通道通过检测微球荧光强度的差异对目的蛋白定性;检测抗体带有PE荧光素标记,在流式细胞仪的FL2通道检测,通过检测抗体的PE荧光强度定量目的蛋白。

CBA技术特点

CBA具有FCM的宽范围荧光检测特点,对样本需求量更少,检测更快速、更准确。下面我们介绍一下CBA主要的技术特点:

  • ◇ 轻松实现多重检测。最多可同时对一个样本中的75个目的蛋白进行精确定量。
  • ◇ 样本需要量小。仅需要50μL溶液就可进行一次检测。
  • ◇ 更高的灵敏度。分析灵敏度高达2.8pg/mL。
  • ◇ 更高的灵敏度、更宽的检测范围和更好的重复性。CBA技术使蛋白定量的分析灵敏度高达pg/ml级别,检测范围达0-5000pg/ml,所有分析只需一组标准曲线。根据抗体的荧光强度对目的蛋白定量,排除了ELISA反应中酶联放大产生的假阳性。
  • ◇ 检测对象的灵活组合—BD CBA Flex Set。CBA kit是同时检测试剂盒配好的6个指标,形式比较固定。为满足不同客户的实际需要和研究兴趣,BD于2005年初推出了CBA Flex set。它改变了CBAkit的固定形式,成为自由组合、灵活搭配的“自助餐”。您可以根据需要组合不同的捕获微球来检测多个指标,最多能同时检测75个指标。除了拥有CBA kit的优势外,Flex Set还配有独立的软件分析系统(CBA Flex Set Analysis Software),并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上,直接用96孔和384孔板进行操作。CBA Flex set赋予研究者更灵活、更自由,更大的选择空间,而且进一步丰富了CBA产品线。种类涉及免疫、细胞信号传导、细胞凋亡等许多领域的蛋白定量分析。
  • ◇ 操作简单,省时省力。CBA技术采用芯片式集成测定,所有检测只需一组标准曲线,就可计算出每种待测蛋白浓度;操作简单,整个流程只需要3.5小时,对待测样本可做实时分析,缩短检测了时间,提高了检测效率。
  • ◇ 强大的软件分析系统。BD CBA软件具有强大的数据处理能力,直接将目标蛋白的检测结果换算成标准浓度;除了为用户提供待测物的计数结果外,还能提供可视轮廓或信号图形以帮助用户获得更多的信息。有用于Macintosh和Microsoft系统两种版本供您选择。和传统的液相蛋白定量技术相比,CBA技术是一种“多元”和“同步”的检测技术。

革新的CBA技术与传统的蛋白定量相比有下列优点:


流式CBA检测技术

检测指标

一个样本同时做到多参数检测

所需样本量

样本用量少于50ul

平台

流式仪器,几乎适用于所有流式仪器,操作方便,节省时间

实验时间

不需要孵育过夜,流式细胞仪自动检测,标准曲线自动测定,专用软件自动计算

背景干扰

无酶-底物背景干扰

CBA检测对象

血清、血浆、眼泪、房水、唾液、体腔灌洗液、细胞培养液上清、细胞裂解物等

CBA应用领域

Luminex Immunoglobulin Isotyping Assays能够同时定量多至6种免疫球蛋白亚型。可以在细胞培养上清液、血清或血浆样品中根据kappa链、lambda链对免疫球蛋白亚型定量,以及总的定量。

  • 炎症因子的水平的分析
  • 肿瘤研究及肿瘤疾病的辅助诊断、疗效和预后监测
  • 凋亡相关蛋白分析
  • 系统性红斑狼疮(SLE)和新生儿脓血症等免疫疾病的监控
  • 干细胞研究和干细胞治疗监测
  • 免疫学研究和免疫疾病的辅助诊断和监控
  • 炎症因子的水平的分析
  • 感染疾病的研究及辅助诊断和疗效评价
  • 免疫功能监测
  • 药效评价,药物研发、疫苗研究
  • 细胞信号传导中磷酸化蛋白、凋亡相关蛋白定量分析

1、CBA指标

目录号 产品说明 检测指标

 557800

 Non-human Primate Th1/Th2 Cytokine Kit

 IL-2, IL-4, IL-5, IL-6,TNF, IFN-γ

 560485

 Mouse Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit

 IL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF, IL-17A, IL-10

 551287

 Mouse Th1/Th2 Cytokine Kit

 IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ,TNF

 552364

 Mouse Inflammation Kit

 IL-6, IL-10, MCP-1, IFN-γ, TNF, IL-12p70

 550026

 Mouse Immunoglobulin Isotyping Kit

 Heavy and light chain isotypes of mouse IgG1,  
 IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM, and IgE

 560484

 Human Th1/Th2/Th17 Kit

 IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-γ, IL-17A

 550749

 Human Th1/Th2 Cytokine Kit

 IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-g

 551809

 Human Th1/Th2 Cytokine Kit II

 IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-g

 551811

 Human Inflammatory Cytokine Kit

 IL-8, IL-1β, IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70

 552990

 Human Chemokine Kit

 IL-8, RANTES, MIG, MCP-1, IP-10

 561418

 Human Anaphylatoxin Kit

 C3A,C4A,C5A



2、CBA Flex Set 细胞因子检测指标

 Human Mouse

Rat

 IFN-γ,INF-α
 IL-1 α ,IL-1β,   
 IL-2,IL-3,
 IL-4 , IL-5, IL-6, IL-7,
 IL-8, IL-9, IL-10,   
 IL-11,IL-12, IL-12p70, 
 IL-13,IL-17A, IL-21, 
 IL-23p40
 TNF,TNFRⅠ,TNFRⅡ
 IP-10
 I-TAC
 MIG
 MCP-1
 MIP-1 α, MIP-1 β
 Eotaxin
 RANTES
 CD54(ICAM-1)
 CD62E,CD62P,CD62L
 CD106(VCAM-1)
 sCD40
 sCD154

 sCD121a,sCD121b
 Soluble CD14
 Basic FGF
 VEGF
 Angiogenin
 G-CSF,GM-CSF
 LIF
 LT-α
 OSM
 Granzyme A, 
 Granzyme B
 Fas Ligand(FasL)
 Fractalkine
 IgA, IgG1, IgG2,  
 IgG3,IgG4, IgM, 
  Total IgG,

 IFN- γ
 IL-1 α ,IL-1β, IL-2,IL-3,
 IL-4 , IL-5, IL-6, IL-9,
 IL-10, IL-12, IL-12p70,
 IL-13, IL-17A, IL-21, 
 IL-23p40,
 TNF
 MIG
 MCP-1
 MIP-1 α, MIP-1 β
 RANTES
 KC
 CD62E(E-Selectin),
 CD62L(L-Selectin)
 G-CSF,GM-CSF

 IFN- γ
 IL-1 α, IL-4 , IL-6,
 IL-10
 TNF

3、CBA Flex Set 信号转导指标

 Phospho Akt1(S473)

 Phospho Akt2(S474)

 Phospho BLNK (Y84)

 Phospho p120 Catenin(Y228)

 Phospho Btk (Y551)

 Phospho MEK1/2(S222)

 Phospho eNOS (S1177)

 Phospho Paxillin(Y118)

 Phospho ERK1/2 (T202/Y204)

 Phospho Pyk2(Y402)

 Phospho Itk (Y511)

 Phospho SLP-76(Y145)

 Phospho JNK1/2 (T183/Y185)

 Phospho c-jun(S63)

 Phospho p38 (T180/Y182)

 Phospho stat3

 Phospho PLCg (Y783)

 Total Stat1

 Phospho Rsk (T573)

 Total Syk

 Phospho Stat1 (Y701)

 Total ZAP70

 Phospho Syk (Y352)

 Phospho ZAP70 (Y319)



4、CBA Flex Set 干细胞指标

 Human Rex-1 Flex Set

 Human Nanog Flex Set

 Human Oct-4 Flex Set

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