Annexin V FITC Apop Dtec Kit I 100Tst

(556547)



概述
货号 556547
描述
Apoptosis小百科

为程序性细胞死亡,起因可能因为外界环境、生长发育等因素而导致自然死亡现象。当细胞发生apoptosis时,会发生细胞膜PS由内外翻至细胞外、线粒体膜电位改变、Caspase活化。DNAfragmentation,一连串的反应使细胞裂解形成凋亡小体,被巨噬细胞识别并清除。
Step 1:Annexin V binding assay / 细胞膜 PS 外翻
凋亡细胞在早期Phosphatidyl-serine(PS)会由细胞膜内外翻至膜外,利用Annexin V检测能让您作为最快速方便的apoptosis指示:
          ● 只需15分钟,让您快速检测早期apoptosis指示
          ● 无须固定,活细胞即可检测
          ● 可利用Flow cytometry或immunofiuorescence分析结果
          ● 选择性多,可搭配Kit或是抗体

 
  Tips:
1. 由于凋亡检测的为活细胞,因此整个收集细胞的操作过程尽量保持细胞活性,避免人为的损伤细胞,如:避免用力吹打细胞,避免胰酶消化时间过长,用冰浴的PBS清洗细胞,缩短上机检测的时间。
2. Annexin-V染料上带FITC荧光,因此从染色开始注意避光操作和孵育,一般尽量在染色后半个小时内上机检测。
3. 如果处理的细胞中含有GFP会干扰FITC的荧光信号,应该更换不同波长的荧光染料标记的Annexin-V。
4. 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin-V结合,从而干扰实验结果。
5. 在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V 与PS的结合,若胞内已转染GFP,建议使用AnnexinV-PE。
以Annexin V-FITC标示外翻的PS,再合并以PI进行的死亡细胞的染色,以区分三种细胞。凋亡细胞可被Annexin V-FITC染成绿色,但对PI拒染;已死亡或Apoptosis后期的细胞因细胞膜已破损会同时染上Annexin V-FITC与PI;健康的细胞则无法染上Annexin
V-FITC或PI
 
产品订购信息:
货号 产品名称 组分/用途 包装
556547 FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit Annexin V-FITC 100tests
Propidium lodide Staining Solutio
Annexin V Binding Buffer
559763 PE Annexin V Apoptosis Detection Kit Annexin V-PE 100tests
7-AAD
Annexin V Binding Buffer
550911 Annexin V-FITC Fluorescence Microscopy Kit Annexin V-FITC 25tests
Annexin V Binding Buffer
PBS Buffer
550474 APC Annexin V   100tests
556420 FITC Annexin V   100tests
556419 FITC Annexin V   200tests
556454 Annexin V Binding Buffer, 10X Concentrate Binding buffer 50ml
556463 Propidium Iodide Staining Solution 碘化丙啶 2ml
559925 7-AAD Staining Solution   2ml
561527 Accutase™ Cell Detachment Solution Accutase消化酶 100ml

 

Step 2:JC-1 assays/破解线粒体膜电位改变
当细胞凋亡时线粒体膜电位的改变,会导致线粒体膜的通透性改变,使Cytochrome C细胞释放至细胞质中,引发下游酵素反应活化,导致Caspase活化,造成一连串凋亡反应。

 

● 只需15分钟,可轻松快速染出线粒体膜电位的改变
● 无须固定,活细胞即可检测
  ● 利用Flow cytometry分析结果
● 操作方便, Kit附有详细完整的protocol
JC-1有两种形式:
1、 正常生理状态下,线粒体负电性高,JC-1进入线粒体以多聚体(Aggregates)存在,FL2 channel可观察到多少红色荧光
2、 细胞走向凋亡时,线粒体去极化产生,负电性降低,JC-1则以单体(Monomer)存在在细胞质,在FL1 channel可以观察到绿色荧光增加。
产品订购信息:
货号 产品名称 组分/用途 包装
551302 BD™ MitoScreen (JC-1) 线粒体膜电位检测 100tests

 

Step 3:Caspase activity assay kits / 检测 Caspase 活化
当Cytochrome C释放至细胞质中,会导致Caspase活化,而活化的Caspase会引发一连串的蛋白质酶解作用(proteolysis cascade),将凋亡信息送至更下游的物质,造成细胞的特征性型态改变。
检测原理:是通过特异性抗体检测全长或者剪切后的Caspase活性
检测方法:流式 WB IF IHC ELISA等

 

1、流式检测方法
货号 产品名称 包装 检测方法
550821 PE Rabbit Anti- Active Caspase-3 100tests 流式
559341 FITC Rabbit Anti- Active Caspase-3 100tests 流式
550557 Biotin Rabbit Anti- Active Caspase-3 100tests 流式
550480 FITC Active Caspase-3 Apoptosis Kit 100tests 流式
2 、WB方法
货号 产品名称 包装 检测方法
9664S Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb 100ul WB
9665S Caspase-3 (8G10) Rabbit mAb 100ul WB
3、ELISA方法
货号 产品名称 包装 检测方法
550578 Human Active Caspase-3 ELISA Pair 100tests ELISA
4、其他方法
货号 产品名称 包装 检测方法
K106-100 Caspase-3 Colorimetric Assay Kit 100tests 比色
K105-100 Caspase-3 Fluorometric Assay Kit 100tests 荧光发光
1007-200 Caspase-3 Substrate DEVD-AFC 200tests 底物显色
更多...

 

Step 4:APO-BrdU&APO-Direct/检测DNAfragmentation现象(TUNEL Assay)
细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA,形成180-200bp的DNA l片段。基因组DNA断裂时,暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) 或者Brdu,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测,这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测细胞凋亡的原理。
流式检测方法:
 

 

产品订购信息:
货号 产品名称 规格 检测方法
556381 APO-DIRECT™ Kit (FITC-dUTP) 50tests 一步法流式
556405 APO-BRDU™ Kit (Br-dUTP) 60tests 二步法流式
550803 BrdU In-Situ Detection Kit 50tests 免疫组化
K403-50 ApoBrdU-IHC DNA Fragmentation Assay Kit 50tests 双色免疫组化

上海优宁维生物科技股份有限公司

使用方法 FC
性能
供应商 BD Pharmingen
标记 FITC
商品评价 (1)

毛*誉

2018-01-05 06:49:57

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