一起来围观，诺奖的mRNA疫苗有哪些必备好物！

今年诺贝尔医学奖授予美国科学家卡塔林·卡里科（Katalin Karikó）和德鲁·魏斯曼（Drew Weissman），表彰他们在核苷碱基修饰方面的发现，从而开发出有效的mRNA疫苗。mRNA疫苗作为一种新型疫苗，不仅在新冠中有突出的贡献，同样有益于其他疾病，尤其是传染性疾病的预防上。小优整理了二位科学家在近年来mRNA疫苗的开发中使用的关键试剂，让大家有更好的选择。

一、无内毒素质粒纯化试剂盒
Drew Weissman在研究中一直选择来自QIAGEN的Endofree plasmid kit，他关注于质粒的产品、纯度、内毒素以及超螺旋占比，对后续的IVT效率有较大的影响，多次发表在Vaccine、Nature、Science Advances等杂质中[1,2,3]。

 

二、病毒RNA纯化试剂盒
QIAamp viral RNA mini kit为新冠研究中的明星试剂盒，被WHO和中国CDC推荐为病毒RNA纯化的第一选择试剂，其独特的回收柱有高达90%的回收率，同样有96孔板高通量形式，适合多种的应用场景[3]。

 

三、mRNA纯化/回收试剂盒
作为mRNA疫苗生产的关键步骤之一，mRNA的加帽率较为重要，纯化效率是mRNA疫苗中的关键一环，Katalin Karikó发表在Pharmaceutics杂志上题为 “Ribozyme Assays to Quantify the Capping Efficiency of In Vitro-Transcribed mRNA” 的一篇文章中，设计了一种核酶介导的加帽效率测定方法，经过实验验证，其加帽效率测定方法优于传统方法。使用了QIAGEN基于硅胶模柱分级纯化方案，即QIAGEN RNeasy Mini kit。该试剂盒中的硅胶模纯化柱可以在不同的缓冲液条件下，结合不同长度的RNA片段。最后，将硅胶柱纯化得到的短5'切割产物和核酶用21% PAGE+8M尿素或者LC-MS进行定量分析和可视化，得出不同方法的结果比较。具体流程如下[4]。

 

 

四、蛋白纯化试剂
QIAGEN的Ni产品一直备受青睐，2022年诺贝尔化学奖得主Carolyn R.Bertozzi，Morten Meldal 和K.Barry Sharpless也多次使用Ni-NTA产品，其四价螯合比Ni-IDA 3价螯合获得的纯化更高，一次纯化即可得到95%纯化蛋白，结合量克搞到50mg蛋白/mL树脂。Drew Weissman同样使用QIAGEN的Ni产品并发表在顶级杂质上[5,6,7,8,9]。

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参考文献：
#1：Anti-PfGARP activates programmed cell death of parasites and reduces severe malaria
#2：Tick immunity using mRNA, DNA and protein-based Salp14 delivery strategies
#3：Immunogenicity and protective efficacy of SARS-CoV-2 mRNA vaccine encoding secreted non-stabilized spike in female mice
#4：Ribozyme Assays to Quantify the Capping Efficiency of In Vitro-Transcribed mRNA
#5：mRNA-LNP expressing PfCSP and Pfs25 vaccine candidates targeting infection and transmission of Plasmodium falciparum
#6：mRNA vaccination induces tick resistance and prevents transmission of the Lyme disease agent
#7：In vivo adenine base editing of PCSK9 in macaques reduces LDL cholesterol levels
#8：A Multi-Targeting, Nucleoside-Modified mRNA Influenza Virus Vaccine Provides Broad Protection in Mice
#9：SARS-CoV-2 mRNA Vaccines Foster Potent Antigen-Specific Germinal Center Responses Associated with Neutralizing Antibody Generation