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THP-1细胞培养全攻略:复苏、传代、冻存及常见问题解析

时间:2024-09-13 11:05:32
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THP-1细胞系源自急性单核细胞白血病,具备多向分化潜能,是研究免疫与炎症的优选工具。其培养需维持酸性环境,推荐传代比例适中,培养条件严格。复苏、传代、冻存操作细致,注意避免细胞聚团与贴壁问题。

 

THP-1细胞培养指南

 

THP-1细胞的培养方法

 

复苏步骤

 

准备工作:确保所需物品如离心管、培养瓶/皿、RPMI 1640培养基、FBS、双抗等齐全,并经过紫外消毒及水浴锅预热至适宜温度。

 

操作流程:

 

1、从超低温存储中快速取出细胞,立即置于预热的水浴中融化。

 

2、转移至细胞操作台,配置含10% FBS和1%双抗的RPMI 1640培养基。

 

3、离心去除冻存液,用新鲜培养基重悬细胞后,接种至预先标记的培养容器中。

 

4、置于标准培养箱中,静待细胞恢复与增殖。

 

注意:维持培养基的微酸性有助于细胞生长,适时观察并调整。

 

细胞复苏

 

传代方法

 

鉴于THP-1的低密度依赖性及悬浮特性,推荐以下两种传代方式:

 

半换液法:直接转移部分细胞至新容器中,补充培养基。

 

离心法:离心收集细胞,重悬后分至新容器,并补足培养基。

 

细胞冻存

 

采用DMSO或专用无血清冻存液,收集健康细胞,离心去除上清,加入冻存液后,按梯度降温程序存储于液氮中。

 

细胞冻存

 

二、培养心得与注意事项

 

复苏挑战:确保足够数量的细胞进行冻存与复苏,以提高成功率。

 

THP-1细胞冻存

处理碎片:细胞碎片可通过低密度培养与低速离心自然消除。

 

聚团管理:少量聚团属正常,严重聚团时考虑提高血清浓度或优化培养条件。

 

THP-1细胞

 

贴壁应对:轻微贴壁可轻吹收集,严重贴壁需检查并调整培养环境。

 

三、问题解析:复苏困难与聚团现象

 

复苏困难:细胞密度是关键,保持适宜的冻存与复苏密度,优化传代管理。

 

聚团严重:聚团可能由营养不足或损伤引起,调整血清用量,避免过高离心速度,并在高密度时自然分散细胞。识别并处理异常聚团,确保细胞健康生长。

 

名称 货号 规格
THP-1 Whole Cell Lysate NBP2-10281-0.1mg 0.1mg
THP-1 + TPA + Poly(dA:dT) Cell Extract 64112S EA