HRP的构成及其多领域应用
一、HRP概览
辣根过氧化物酶，其英文名称Horseradish Peroxidase，简称HRP，酶学编号为EC1.11.1.7，源自辣根（学名Amoracia rusticana）植物。作为过氧化物酶家族的一员，HRP以其铁原卟啉基团为核心，展现出一系列同工酶形式，其中HRP C最为显著，广泛存在于辣根的根部。
二、深入HRP的结构解析
HRP的分子结构由糖蛋白（即酶蛋白）与铁(III)原卟啉IX（作为辅基）紧密结合而成，形成包含四个二硫键的单链多肽。其糖蛋白成分中，糖类占比约为18~22%，由多种单糖如半乳糖、阿拉伯糖等构成，具体种类取决于具体的同工酶类型。HRP在紫外光谱下的特定波长（275nm与403nm）展现出吸收峰，通过计算OD403nm与OD275nm的比值RZ（即纯度指数），可以评估其纯度，高纯度HRP的RZ值常超过3.0。
特别地，HRP C作为研究最为深入的同工酶，拥有308个氨基酸残基与8条糖链，结合有2个Ca2+离子、1个铁(III)原卟啉IX辅基及4对二硫键，整体分子量约为44,000道尔顿。至少存在7种HRP同工酶，它们各自具有独特的等电点，范围跨越3.0至9.0，这些特性深刻影响着HRP的酶学行为及生理功能。
三、HRP的生物化学与生理角色
HRP能够高效结合过氧化氢（H2O2），形成[HRP-H2O2]复合物，进而催化多种氢供体（如芳香族化合物、酚类等）的氧化反应，生成自由基和水。在实际应用中，常利用无色供氢体在反应后转变为有色产物的特性，通过比色分析来定量检测。HRP的反应最适pH多在6.0-6.5之间，且在pH 5.0-9.0范围内保持稳定，适宜在接近室温（如25℃）条件下进行。
HRP通过多样化的方法与抗体结合，如戊二醛交联、高碘酸盐氧化等，因其体积小、稳定性高，成为优于β-半乳糖苷酶和碱性磷酸酶的标记选择。此外，其糖基化特性有助于减少非特异性结合，提升检测准确性。
四、HRP的广泛应用领域
ELISA技术：HRP因其易获取、成本低廉且稳定性强，成为ELISA中最常用的标记酶之一，与抗原或抗体偶联后活性损失极小。
化学发光检测与生物实验：HRP也广泛应用于化学发光检测、免疫印迹及免疫组织化学实验，与葡萄糖氧化酶联用还能有效检测葡萄糖含量。
环境保护：在污水处理领域，HRP能够氧化苯酚等有害化合物，生成沉淀聚合物，显著降低环境污染。
食品工业：近年来，HRP因其无毒无害、反应条件温和可控，正被探索用于食品保鲜、解毒及质量检测等方面。
抗体-HRP标记流程简述
抗体透析：在碳酸盐缓冲液中透析抗体，去除杂质。
HRP氧化：使用高碘酸盐氧化HRP。
氧化终止：乙二醇终止氧化反应。
抗体标记：将氧化后的HRP与透析好的抗体混合反应。
标记终止：硼氢化钠终止标记反应。
纯化保存：通过透析纯化标记物，并加入甘油保存。
| 名称 | 货号 | 规格 |
| Peroxidase AffiniPure™ Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | 115-035-003 | 2ml |
| Mouse anti-CD206 Monoclonal Antibody(JMMR-835) | 016-030-084 | 1mg |
| Peroxidase AffiniPure™ Goat Anti-Mouse IgG (H+L) | 115-035-003 | 2ml |
