细胞污染：识别、处理与预防

细胞污染

细胞作为生命活动的基本单位，在生命科学及医学领域扮演着至关重要的角色。学会正确地进行细胞培养是细胞实验的基础，然而，细胞培养过程中的污染问题却常常让实验者头疼不已。

细胞污染是一个广泛存在的问题，微生物的种类繁多，不同的污染类型具有不同的特征和影响。

细菌污染：细菌污染通常表现为培养液浑浊变黄，镜下可见杆状或球状的细菌在培养基中游动。芽孢杆菌、葡萄球菌是细菌污染的主要菌属，它们增殖迅速，对细胞造成明显伤害。
真菌污染：真菌污染的培养液一般清亮不变色，但肉眼可见点状菌落漂浮在培养基表面。镜下观察可见丝状物，真菌生长较慢，但一旦发现，细胞往往已被污染且难以救活。
支原体污染：支原体污染的培养液可能浑浊，但镜下无法直接看到支原体。支原体感染细胞后，细胞病变不明显，但会逐渐死亡。支原体是牛血清中最常见的微生物之一，污染发生率高。
黑胶虫污染：黑胶虫污染表现为培养液不浑浊，镜下可见黑色小点游动。这种污染对细胞生长状态影响不大，但在细胞增殖旺盛后会自然消失。
病毒污染：病毒污染在组织细胞培养过程中较为常见，如果未除去潜在的病毒，会影响疫苗的生产安全性。
交叉污染：交叉污染是由于细胞培养操作时，各细胞株所需的器具和试剂没有严格分开，导致一种细胞被另一种细胞污染。

面对细胞污染，及时有效的处理至关重要。然而，完全去除细胞中的微生物污染是非常困难的，因此，对于确定污染的细胞，最好的办法是及时丢弃，并积极排查污染原因。

判断污染源：一旦发现细胞有污染的迹象，立即判断可能的污染源，包括操作不当、培养基、胰酶、PBS等的质量问题。
及时处理：若确定现有培养基、胰酶、PBS可用，则继续使用；若无法确定，则新配完全培养基、PBS、胰酶，并对原有液体进行污染检测。
细菌和真菌的清除：采用抗生素法或裸鼠体内接种法清除细菌和真菌污染。抗生素法对杀灭细菌较有效，但需采用大于常用量5-10倍的冲洗法，并作用24-48小时。裸鼠体内接种法是利用动物的免疫系统来消灭污染微生物，是比较有效和彻底的除菌方法。
支原体的清除：采用支原体清除剂、清洗纯化法、药物处理或使用支原体特异性血清等方法清除支原体污染。
黑胶虫的清除：黑胶虫污染主要源于血清，建议更换质量好的血清，增加细胞密度，提高细胞生长率。
病毒和交叉污染的清除：病毒和交叉污染较难清除，建议丢弃细胞重新培养。

预防是防止细胞培养过程中发生污染的最好办法。只有预防工作做在前，才能将发生污染的可能性降到最小程度。

在培养液中添加抗生素：可以在培养基中事先加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素），但需注意双抗可能影响细胞状态，实验前需撤去。
严格消毒灭菌：细胞培养所用物品要彻底清洗、消毒，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。定期对操作室及剩余的无菌器材进行清洁消毒灭菌。
规划实验操作：进入实验室环境时，佩戴好口罩及手套，穿上洁净实验服。超净台用紫外灯照射并擦拭台面后开始实验操作。操作时动作要轻，避免污染，实验用品用完应移出超净台。
防止细胞交叉污染：在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，避免细胞间的交叉污染。每次操作最好只处理一种细胞，多种细胞多种操作一起进行时易发生污染。
及时保种冻存：所有新购入或接入的细胞，必须及时保种冻存，一旦发生污染可重新复苏细胞继续培养。

细胞污染是细胞培养过程中不可避免的问题，但通过正确的识别、处理与预防措施，我们可以最大限度地减少污染的发生，确保实验的顺利进行。希望本文能为细胞培养工作者提供有价值的参考和帮助。