小鼠脾脏是一个重要的免疫器官，位于小鼠左侧腹腔中，靠近胃的左侧，呈长椭圆形状。大小会根据小鼠的品种和健康状况有所不同，一般来说，成年小鼠的脾脏长度大约在1.5厘米到2.5厘米之间。脾脏的颜色和质地可能会因为小鼠的品种和健康状况而有所变化，通常呈现出类似叶片的形态，颜色暗红。在实验研究中，小鼠脾脏细胞的分离、培养和计数是免疫学研究的重要方法，也是流式细胞术分析的前提。
一、耗材与试剂
表1 小鼠脾脏解离部分试剂耗材参考表
| 材料 | 试剂 | 设备 |
| 15/50mL离心管 | 1xPBS缓冲液 | 水平恒温摇床 |
| 10cm培养皿 | RPMI 1640培养基 | 血细胞计数板 |
| 眼科手术剪、眼用镊 | 75%酒精 | 电动移液器、1mL枪头 |
| 100μm细胞筛网 | FBS | 高速离心机 |
| 10mL移液管 | HBSS平衡液溶液 | 涡旋仪 |
| 5mL流式管 | Absin组织解离试剂盒 | 4℃冰箱 |
| 细胞染色缓冲液 | 流式细胞仪 |
表2 产品信息
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 用途 |
| abs50097 | 小鼠脾脏组织解离试剂盒 | 10T/25T | 解离组织 |
| abs7303 | 5mL流式管(无菌无酶,带盖) | 500个/箱 | 流式管 |
| abs9484 | RPMI1640培养基 | 500mL | 保存细胞活性 |
| abs7232 | 70um细胞筛网 | 100个/箱 | 耗材 |
| abs7102 | 15mL离心管(尖底) | 100支/袋 | 耗材 |
| abs7100 | 50mL离心管(尖底) | 40支/袋 | 耗材 |
| abs962 | PBS缓冲液(1x) | 500mL | 试剂 |
| abs9475 | 细胞染色缓冲液 | 500mL | 试剂 |
| abs9101 | 红细胞裂解液(1x) | 100mL/500mL | 裂红液 |
二、实验步骤
实验前准备：将脾脏小鼠脾脏组织解离试剂盒至于37度水浴锅中预热（脾脏组织解离试剂收到后，推荐分装冻存），如果使用红细胞裂解液为10×，需提前用超纯水稀释成1×。PBS提前预冷。
1.将小鼠颈部脱臼处死，75%酒精消毒小鼠表面，至于托盘中，左侧腹部朝上，镊子辅助操作，提起左腹侧中部皮肤，剪开皮肤，肉眼可见暗红色，长条状脾脏，剪开腹膜，镊子提起脾脏，见到分离，尽可能的除去结缔组织和脂肪，PBS冲洗，取新鲜小鼠脾脏组织 100mg—200mg左右（一个20g的小鼠，脾脏重量可能在100mg左右，具体以实际情况为准）加至50ml无菌离心管中，用眼科剪将组织彻底剪碎至 1-2mm3 ，加入小鼠脾脏组织解离试剂1mL。
2. 将离心管置于恒温摇床上，37℃/180rpm 震荡孵育30min 左右，消化小鼠脾脏组织，可根据组织状态适当调整消化时间（脾脏相对比较好消化），混悬液中肉眼无明显组织块时，取少量悬液倒置显微镜下观察，可辅助判断，有大量活细胞即可停止消化（中心明亮），也可用台盼蓝染色或者其他方式。
红色圈内：死细胞 绿色圈内：活细胞
3. 孵育结束后将离心管内的组织匀浆用 70um 无菌过滤器过滤，然后加入细胞培养基冲洗无菌过滤器，用 50mL的离心管收集滤液。
4. 将收集的滤液 1200rpm 离心 5min ，弃上清。
5.可使用红细胞裂解液去除组织解离过程中的红细胞，具体操作为，向第4步所得的沉淀加入3ml 1×红细胞裂解液，重悬沉淀，涡旋混匀，室温下避光孵育3-5min，加入2ml预冷的PBS, 1200rpm 离心 5min，弃上清。重复洗涤一次。
6.弃上清，细胞染色缓冲液重悬细胞沉淀，并调整细胞浓度至5-10×106个细胞/mL，将100 uL/管的细胞悬液分配到12×75mm的流式管中，进行后续实验。
三、问题及策略
1、细胞得率低
一般情况下，成年C57BL/6小鼠一个脾脏可解离出大约10×108–1.4×108个细胞，如果发现细胞得率特别低，需要注意，样本获取阶段要尽可能完全去除组织周围的脂肪，尽可能将组织剪碎，从而提高细胞产量。在涉及的清洗步骤中，倒出上清液前，先用移液枪吸弃上层脂肪（可将枪头尖端修剪一下，避免吸气时堵塞）
2、细胞活率低，死细胞/碎片多
首先，解离试剂孵育的时间不能过长，长时间孵育会造成细胞活力降低及表面标记物丢失，死细胞过多，释放DNA丝缠绕，导致溶液粘稠，其次，千万不要缩短清洗的步骤，清洗可以帮助去除粘连体、碎片和死细胞，红细胞裂解液的孵育时间也不能过长，一般5min即可，如果细胞活力还是很低，建议检查红细胞裂解液是否新鲜有效。
3、红细胞裂解不完全
表现为洗涤步骤后出现明显的红色沉淀。确保制备新鲜的红细胞裂解缓冲液，在室温下进行裂解。裂解开始前，要确保细胞已完全重悬，裂解时间不能过短。
四、解离效果
该试剂盒讲小鼠Spleen组织处理为单细胞悬液后做流式：细胞活力、CD45、CD3、CD4、CD8染色结果
注：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究
五、其他产品推荐
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| abs9907 | 流式绝对计数管 | 50T |
| abs9477 | 小鼠Fc受体阻断剂 | 200T/500T |
| abs9476 | 人Fc受体阻断剂 | 50T/200T |
| abs9488 | 鞘液 | 20L |
| abs9107 | 佛波酯 | 1mg/5mg/25mg |
| abs9108 | 离子霉素钙盐 | 1mg/5mg |
| abs970 | D-PBS缓冲液(1×,无钙镁) | 500mL |
| abs810012 | Brefeldin A | 10mg/25mg/50mg |
| abs812975 | Monensin sodium salt | 25mg/100mg |
| abs9475 | 细胞染色缓冲液 | 500mL |
| abs9110 | 固定剂 | 50mL |
| abs9111 | 破膜剂 | 150mL |
| abs7303 | 5mL流式管(无菌无酶,带盖) | 1箱 |
| abs1840002 | APC Mouse anti-Human CD3 Antibody(3JI3-9) | 25T/100T |
| abs182427 | PE Mouse anti-Human CD4 Antibody(5D4) | 25T/100T |
| abs182430 | FITC Mouse anti-Human CD8 Antibody(3C4) | 25T/100T |
| abs180046 | PE-Cy7 Mouse anti-Human CD25 Antibody(BC96) | 25T/100T |
| abs1840696 | FITC Mouse anti-Human CD80 Antibody(2D10.4) | 25T/100T |
| abs182338 | APC Rat anti-Mouse CD25 Antibody(4APC61.5) | 25T/100T |
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