Thermo变色龙Chromeleon软件操作指南

日常维护保养

1. 保持贮液瓶清洁：对专用贮液瓶应定期进行清洗；若使用试剂瓶作为贮液瓶，则需经常更换。建议定期（例如每半个月）将过滤器置于稀硝酸溶液中进行超声清洗，以确保过滤器畅通无阻。
2. 使用合适的试剂和溶剂：采用HPLC试剂和新蒸二次蒸馏水作为流动相。所使用的溶剂的截止波长必须低于检测波长。对于非HPLC级的试剂，必须进行过滤（HPLC试剂在出厂前已用0.02μm滤膜过滤）。此外，流动相必须进行脱气处理。
3. 流动相的使用期限：流动相的使用时间不宜超过两天，尤其是在夏天，最好每天新鲜配制，以防止微生物生长。腐蚀性溶剂或缓冲液不应在泵内过夜存放，以免对泵造成腐蚀。使用腐蚀性物质后，应先用水冲洗，再用甲醇冲洗。
4. 排气操作：每天开始使用仪器时，应注意放空排气，确保泵头、流动池以及其他流路系统中无气泡存在。
5. 保护色谱柱：珍惜并保护色谱柱，避免柱头突然产生大的波动，从而扰动损伤柱床。例如，应避免泵启动过速、升压过快或样品阀搬动过慢所导致的柱压大幅波动。
6. 使用保护柱：采用保护（警戒）柱以延长色谱柱的使用寿命。当污染物堆积在保护柱柱头，导致柱压升高、柱效下降或峰形变差时，应卸下保护柱，用强溶剂反冲后再次使用或更换新的保护柱。
7. 避免超负荷进样：对于250×4.6mm的色谱柱，绝对进样量不应超过100μg。在灵敏度允许的情况下，应尽量降低试样浓度，以减少绝对进样量（进样体积可保持不变），这是保持HPLC柱性能持久良好的重要措施之一。
8. 定期冲洗柱子：经常使用强溶剂冲洗柱子，及时将柱内强保留组分洗脱出来。反相柱可用异丙醇-二氯甲烷（1：1）冲洗，正相（硅胶柱）可用纯甲醇或异丙醇冲洗，每次冲洗时间均不少于1小时。
9. 试验后的冲洗：完成试验后，应及时用适当的溶剂冲洗柱子和进样阀，特别是对于过夜的柱子和进样阀，必须用足量的水彻底洗净其中的盐类、缓冲液，再用甲醇或乙腈冲洗，并保存在乙腈（或甲醇）中。正相柱则应保存在非极性有机溶剂（如己烷）中。
   • 含盐流动相的冲洗方法：每天操作结束后，先用纯化水或含甲醇5%的水冲洗约20～30分钟，再用纯甲醇冲洗约30～60分钟。注意不能直接用有机溶液冲洗，以免盐类析出，堵塞色谱柱，造成永久性损坏。所用水最好是重蒸馏水，并且必须抽滤和脱气。
   • 不含盐的流动相冲洗方法：每天操作结束后，先用流动相冲洗约10～15分钟，再用含5%甲醇的水冲洗10～20分钟，最后用纯甲醇冲洗，时间约20～30分钟。注意不能直接用纯水冲洗，以免造成流动相停止。
10. 控制流动相的pH值：对于以硅胶为基质的色谱柱（如C-18、C-8等），应控制好流动相的pH值，一般不要低于2.5，也不要高于7.0。pH值大于8会导致硅胶骨架溶解，而pH值小于2则会使键合相化学键易于剥离。
11. 样品溶解：尽量使用流动相溶解样品，这样可以避免出现拖尾峰或怪峰，同时也能防止试样在系统中因溶解度降低而析出。
12. 分析酸碱性物质：在用HPLC分析酸碱性物质时，由于吸附作用（次级保留）可能会导致峰形拖尾。加入改良剂可以显著改善峰形，提高积分的准确度。一般规则如下：
    • 分析酸性物质：可加入1%的醋酸。
    • 分析碱性物质：可加入10-20mmol/L的三乙胺。
    • 酸碱物质混合：可同时加入1%的醋酸和10-20mmol/L的三乙胺。