Lipofectamine™ 2000
在生物医学研究领域，细胞转染技术是将外源核酸导入细胞的重要手段，对于基因功能研究、蛋白表达调控以及药物筛选等方面具有关键作用。Lipo2000 试剂作为一种经典的脂质体转染试剂，因其广泛的适用性和较高的转染效率，成为了众多科研工作者的首选。本文将详细介绍 Lipo2000 试剂的使用范围、细胞转染前的准备、DNA 准备、转染复合物制备、转染操作以及注意事项，旨在为科研人员提供一份详尽的使用指南。
一、Lipo2000 试剂的使用范围
Lipo2000 试剂具有广泛的使用范围，它不仅可以用于质粒 DNA 转染、siRNA 表达载体转染、双链核糖核酸（dsRNA）转染以及 RNA 等核酸转染，还可以用于文库筛选的高通量转染。在细胞转染方面，Lipo2000 几乎涵盖了 HEK293、CHO 细胞、HeLa 等 190 多种细胞系，为不同类型的细胞转染提供了可靠的解决方案。
二、细胞转染前的准备
转染效率在很大程度上依赖于细胞培养密度。由于 Lipo2000 脂质体转染试剂具有一定的细胞毒性，因此在使用时需要确保高细胞密度。建议根据细胞的生长速度提前种板，并使用不含抗生素的培养基进行培养，使细胞在转染时处于对数生长期并达到 80% - 90% 汇合。这样的细胞状态有助于获得最高的转染效率和表达水平，同时能够最小化高转染活性对细胞生长的抑制影响。科研人员可以通过预实验观察细胞对试剂毒性的耐受程度，进而调整细胞密度，以达到最佳的转染效果。
三、DNA 准备
内毒素是影响转染效率的重要因素之一。为了确保转染的高效进行，必须使用无内毒素的试剂盒抽提质粒，以获得高纯度的 DNA。在 DNA 的纯度检测方面，紫外可见光光度法是常用的测量手段。通过该方法测得的质粒纯度 A260/A280 比值应在 1.7 - 1.9 之间，且越接近 1.8 越好。准确测量 DNA 浓度并进行标记计算用量，是确保转染实验顺利进行的关键步骤。
四、转染复合物制备
血清的存在会干扰转染复合物的形成，从而降低转染效率。因此，在制备转染复合物时，应使用无血清培养基，如 Opti-MEM。以下是具体的制备步骤：
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Lipo2000 稀释液：取适量的 EP 管，加入 1500μl（250μl/孔）Opti-MEM，随后加入 60μl（10μl/孔）Lipo2000，轻轻混匀。将稀释液置于室温下静置 5 分钟，以确保 Lipo2000 充分分散。
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DNA 稀释液：根据 DNA 的种类不同，分别在 EP 管中加入 250μl/孔 Opti-MEM，再加入 4μg/孔质粒 DNA，轻轻混匀。这一步骤的目的是使 DNA 在稀释液中均匀分布。
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复合物形成：将 1) 中的 Lipo2000 稀释液以 250μl/孔的量加入到 2) 中的各 DNA 稀释液中，轻柔混匀。将混合液置于室温下静置 30 分钟，使 DNA 与 Lipo2000 充分结合，形成稳定的 DNA-Lipo2000 复合物。
在制备过程中，DNA 与 Lipo2000 的比例对转染效率有重要影响。对于绝大多数细胞系，通常推荐的比例为 1:2 - 1:3。具体的推荐比例如下表所示：
五、转染操作
在进行转染操作前，需要对细胞培养基进行更换。具体而言，细胞在转染前 1 小时左右应更换为新的无双抗无血清培养基。这一步骤的目的是为了避免血清中的成分干扰转染复合物的形成和作用。接下来，将制备好的 DNA-Lipo2000 复合物分别加入到细胞培养基中，轻轻摇动培养板，使复合物在培养基中分布均匀。将培养板放入 37℃、5% CO₂ 的培养箱中培养 24 - 48 小时。为了确保细胞的正常生长和转染效果，在转染后的 4 - 6 小时更换为完全培养基，为细胞提供充足的营养和适宜的生长环境。
六、观察
如果转染的是带有荧光标签的质粒，可以通过荧光显微镜观察转染效率。在荧光显微镜下，荧光信号的强度和分布可以直观地反映转染的成功与否以及转染的效率。通过观察荧光信号，科研人员可以评估转染实验的效果，并对实验条件进行相应的调整和优化。
七、注意事项
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保存条件：Lipo2000 脂质体转染试剂应保存在 4℃ 的环境中，不可进行冻存。冻存会破坏脂质体的结构，从而影响其转染效率。
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避免氧化：Lipo2000 脂质体转染试剂应避免长时间暴露在空气中，因为空气中的氧气会导致脂质体氧化，进而影响转染效率。在使用过程中，应尽量减少试剂与空气的接触时间。
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培养基选择：有些无血清培养基，如 DMEM、CD293、SFMII、V-SFM 等，在稀释 DNA 和转染试剂时可能会降低转染效率。因此，在选择培养基时，应根据具体的实验需求和细胞类型进行合理选择。
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操作方式：Lipo2000 脂质体转染试剂不能进行涡旋、离心或暴力吹打等操作。这些操作可能会破坏脂质体的结构，影响其转染效率。正确的操作方式是缓慢晃动混匀，以确保试剂的均匀性和稳定性。
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用量优化：本文提供的 Lipo2000 用量仅供参考，具体的用量应根据细胞类型、铺板密度以及其他实验条件进行优化。不同的实验条件可能会影响转染效率，因此需要通过预实验等手段确定最佳的用量和条件。
综上所述，Lipo2000 试剂作为一种广泛应用的脂质体转染试剂，在细胞转染领域具有重要的地位。通过合理的实验设计和操作，科研人员可以充分利用 Lipo2000 试剂的优势，实现高效的细胞转染，为生物医学研究提供有力的支持。
| 名称 | 货号 | 规格 |
| T-2000 | abs824196-50mg | 50mg |
| Methoxy PEG Succinimidyl Carboxymethyl Ester 2000 | abs42152408-1g | 1g |
| Puradisc 13/0.2 RC 2000/pk | 6758-1302 | EA |
| PURADISC 13/0.45 H-PTFE 2000/PK | 29439500 | EA |
