PVDF膜（聚偏二氟乙烯膜）和硝酸纤维素膜（NC膜）
PVDF膜（聚偏二氟乙烯膜）和硝酸纤维素膜（NC膜）是分子生物学实验中常用的两种转印膜，尤其在Western Blot技术中发挥着核心作用。二者在性能、成本和应用场景上存在显著差异，选择时需结合实验需求综合考量。以下从物理特性、化学稳定性、应用场景及成本等维度进行系统对比。
一、核心功能与基础特性
1. PVDF膜
- 化学组成：聚偏二氟乙烯（疏水性高分子材料）
- 结合机制：通过疏水作用和静电作用结合蛋白质，需甲醇预处理活化结合位点
- 结合能力：100-200 μg/cm²（是NC膜的1.5-2倍）
- 适用场景：
-
低分子量蛋白（＜20 kDa）检测
-
需多次剥离（stripping）和重复检测的实验
-
蛋白质测序、质谱分析等严苛操作
PVDF膜结构示意图
-
2. 硝酸纤维素膜（NC膜）
- 化学组成：硝化纤维素（含部分醋酸纤维素）
- 结合机制：依赖疏水作用直接结合蛋白质，无需预处理
- 结合能力：80-150 μg/cm²（纯度100%时）
- 适用场景：
-
常规蛋白质检测（＞20 kDa）
-
快速免疫检测、单次实验
-
荧光标记检测（如SYBR染料）
硝酸纤维素膜电镜图
-
二、性能参数对比
| 参数 | PVDF膜 | 硝酸纤维素膜 |
|---|---|---|
| 机械强度 | 高（可反复操作） | 低（脆性，易碎裂） |
| 耐化学性 | 耐酸碱、有机溶剂 | 不耐有机溶剂 |
| 温度耐受性 | -10℃~150℃ | -10℃~40℃ |
| 孔径选择 | 0.2 μm（小分子） / 0.45 μm | 0.2 μm（＜20 kDa） / 0.45 μm |
| 背景干扰 | 较高（需严格封闭） | 低（易封闭） |
| 成本 | 高（约NC膜的2-3倍） | 低 |
三、应用场景选择指南
▶ 优先选择PVDF膜的情况
- 实验条件严苛：需在有机溶剂、强酸碱环境中操作
- 检测小分子蛋白：0.2 μm孔径PVDF膜对＜20 kDa蛋白结合更牢固
- 多次检测需求：如剥离后重复使用同一膜检测不同抗体
- 长期保存或测序：PVDF膜稳定性高，适合存档或N端测序
▶ 优先选择NC膜的情况
- 常规检测：大分子蛋白（＞20 kDa）的快速Western Blot
- 荧光标记：兼容SYBR Green等荧光染料，背景干扰低
- 成本敏感项目：预算有限且无需复杂操作
四、关键操作注意事项
1. PVDF膜预处理
- 甲醇活化：浸泡50%甲醇10-15秒至半透明，平衡缓冲液后使用
- 避免干燥：使用过程中需保持湿润，否则需重新活化
2. NC膜使用优化
- 孔径匹配：0.45 μm用于＞20 kDa蛋白，0.2 μm用于小分子
- 封闭剂选择：推荐0.05%-0.3% Tween 20，避免使用高浓度去垢剂
五、总结
PVDF膜与NC膜的选择需基于实验目标、蛋白特性及操作环境：
- PVDF膜：适合小分子蛋白、严苛条件和长期保存，但成本较高；
- NC膜：适合常规检测和荧光应用，性价比突出但机械强度低。
通过合理匹配膜类型与实验需求，可显著提升Western Blot的灵敏度和重复性 。
| 名称 | 货号 | 规格 |
| PVDF膜（0.22μm） | abs931-1卷（30cm×3m） | 1卷（30cm×3m） |
| Amersham Hybond P 0.45UM PVDF 300MMx4M 1/PK | 10600023 | 1卷 |
| Amersham Hybond P 0.2UM PVDF 260MMx4M 1/PK | 10600021 | 1卷 |
| PVDF膜（0.45μm） | abs932-1卷（30cm×3m） | 1卷（30cm×3m） |
