ECL化学发光检测试剂盒
ECL（Electrochemiluminescence）化学发光检测试剂盒是Western Blot实验中不可或缺的核心试剂，通过辣根过氧化物酶（HRP）催化鲁米诺与过氧化氢的氧化反应，实现高灵敏度蛋白检测。其检测限可达飞克级（fg），广泛应用于低丰度蛋白分析、疾病诊断及药物开发等领域。本文结合技术原理与实验数据，系统解析商品化ECL试剂盒的关键性能指标及优化策略。
ECL化学发光检测试剂盒工作原理示意图
一、核心工作原理与技术创新
1. 反应机制
ECL试剂盒通过HRP催化鲁米诺（Luminol）与过氧化氢（H₂O₂）的氧化反应，生成激发态中间体3-氨基邻苯二甲酸，退激时释放425 nm波长的光子信号 。新一代增强型试剂通过添加酚类衍生物（如对碘苯酚），可将信号强度提升30-100倍，同时延长发光时间至8-24小时 。
2. 技术突破
- 灵敏度分级：
- 普通型（abs920）：检测限1-10 pg级，适用于常规蛋白检测
- 超敏型（abs9434）：低至0.1 pg级，适合稀有样本
- 极敏型（abs9435）：飞克级（0.01 pg），满足痕量蛋白分析需求
- 信号稳定性：采用新型氧化剂（如硫酸铵过硫酸盐）替代传统双氧水，室温保存稳定性延长至1年 。
二、产品性能对比与选型指南
| 参数 | 普通型（abs920） | 超敏型（abs9434） | 极敏型（abs9435） |
|---|---|---|---|
| 检测灵敏度 | 中等皮克级（1-10 pg） | 低皮克级（0.1-1 pg） | 低飞克级（0.01 pg） |
| 信号持续时间 | <12小时 | <12小时 | <8小时 |
| 抗体稀释倍数 | 一抗1:1000-1:4000 | 一抗1:1000-1:10000 | 一抗1:5000-1:100000 |
| 适用场景 | 常规WB实验 | 低丰度样本 | 痕量蛋白/珍贵样本 |
不同型号ECL试剂检测灵敏度对比图
三、关键操作流程与优化策略
1. 标准操作步骤
- 工作液配制：按1:1比例混合A液（含鲁米诺）与B液（含氧化剂），每10 cm²膜需1 mL混合液 。
- 膜孵育：均匀覆盖膜表面，避光反应1-5分钟。
- 信号采集：
- X光胶片法：曝光时间30秒-10分钟
- CCD成像仪：动态范围捕获（推荐冷CCD系统）
2. 抗体使用优化
- 一抗/二抗稀释：极敏型试剂可支持二抗稀释至1:500,000，显著降低实验成本
- 封闭剂选择：推荐5%脱脂牛奶（避免使用含NaN₃的缓冲液，抑制HRP活性）
四、注意事项与故障排除
▶ 关键注意事项
- 溶液污染防控：A液与B液需严格分枪头取用，交叉污染将导致试剂失效
- 信号采集时机：反应后30分钟内为信号峰值期，建议优先完成曝光
- 保存条件：2-8℃避光保存，开封后需密封防氧化
▶ 常见问题解决方案
| 现象 | 原因分析 | 优化措施 |
|---|---|---|
| 背景过高 | 封闭不充分/抗体浓度过高 | 延长封闭时间至2小时，降低抗体浓度 |
| 信号微弱 | HRP活性丧失 | 检查二抗有效期，避免叠氮钠污染 |
| 膜上出现斑点 | 环境湿度过低（＜30% RH） | 平衡膜湿度至45-65% RH |
Western Blot检测结果示意图（清晰检测线 vs 背景污染）
五、技术前沿与品牌推荐
1. 创新方向
- 多重检测系统：开发兼容AP/HRP双标记的ECL试剂，实现同一膜多靶点检测
- 智能成像整合：适配AI驱动的CCD系统，自动优化曝光参数
六、总结
ECL化学发光检测试剂盒的性能优化需综合考虑灵敏度需求、抗体经济性及信号稳定性：
- 常规实验首选普通型abs920，平衡成本与效果；
- 稀有样本推荐超敏型abs9434，灵敏度提升10倍；
- 痕量分析必备极敏型abs9435，突破飞克级检测极限。
通过精准匹配试剂类型与实验目标，可显著提升Western Blot的数据质量与研究效率。
| 名称 | 货号 | 规格 |
| ECL化学发光检测试剂盒 | abs920-25mL×2 | 2*50ml |
| ECL化学发光检测试剂盒 | abs920-25mL×2 | 25mL×2 |
| ECL化学发光检测试剂盒 | abs920-50mL×2 | 50mL×2 |
| ECL化学发光检测试剂盒 | abs920-250mL×2 | 250mL×2 |
