靶向淋巴结的mKRAS特异性两亲性疫苗在胰腺癌与结直肠癌中的突破性进展
——基于AMPLIFY-201 I期临床试验的机制解析与临床转化前景
Lymph-node-targeted, mKRAS-specific amphiphile vaccine in pancreatic and colorectal cancer: the phase 1 AMPLIFY-201 trial
研究背景与科学基础
KRAS基因突变是实体瘤中最常见的致癌驱动因素之一，约50%的结直肠癌（CRC）和90%的胰腺导管腺癌（PDAC）携带KRAS突变，其中G12D和G12R亚型占比超过60% 。传统化疗及免疫检查点抑制剂对KRAS突变肿瘤疗效有限，而直接靶向KRAS的小分子抑制剂（如sotorasib）仅对G12C突变有效，且易产生耐药性。因此，开发针对KRAS突变的新型免疫疗法成为临床迫切需求。
ELI-002 2P是一种创新性两亲性（amphiphile）疫苗，其设计基于以下科学突破：
- 抗原选择：针对KRAS G12D和G12R突变表位，覆盖约80%的PDAC和CRC患者人群；
- 递送优化：通过脂质尾部修饰的肽链（Amph-Peptide）增强疫苗的淋巴结靶向性，促进抗原提呈细胞（APC）摄取；
- 佐剂协同：结合TLR9激动剂CpG 7909，激活树突状细胞并促进T细胞克隆扩增。
临床前研究表明，该疫苗可诱导高滴度KRAS突变特异性CD8+ T细胞，并在小鼠模型中清除80%的肝转移灶 。
临床试验设计与方法学创新
AMPLIFY-201是一项开放标签、剂量递增的I期临床试验（NCT04853017），旨在评估ELI-002 2P在术后微小残留病灶（MRD）阳性患者中的安全性与免疫原性。研究设计具有以下亮点：
受试人群与分层
| 参数 | 数据（n=25） |
|---|---|
| 肿瘤类型 | PDAC（20例）, CRC（5例） |
| KRAS突变亚型 | G12D（68%）, G12R（32%） |
| 基线MRD状态 | ctDNA阳性（100%） |
| 既往治疗 | 根治性手术+辅助化疗（100%） |
给药方案与评估体系
- 疫苗组成：每剂含7种Amph-Peptide（各100 μg） + CpG 7909（0.2 mg）
- 给药方式：皮下注射（第1、4、7、10周），最多10剂
- 终点指标：
- 主要终点：安全性（CTCAE v5.0）、剂量限制性毒性（DLT）
- 次要终点：T细胞应答率（IFN-γ ELISpot）、ctDNA清除率、无复发生存期（RFS）
- 创新检测技术：
- 单细胞TCR测序：追踪抗原特异性T细胞克隆动态
- 多重免疫荧光：量化肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）
核心研究结果与机制解析
1. 安全性特征与耐受性
所有患者均未出现剂量限制性毒性或治疗相关严重不良事件（SAE）。常见不良事件包括：
- 1-2级局部反应：注射部位红斑（64%）、硬结（48%）
- 全身性反应：疲劳（52%）、低热（28%），均为一过性
- 实验室异常：无症状淋巴细胞减少（16%），7天内自行恢复
表1 安全性数据汇总（n=25）
不良事件类型 发生率（%） 严重程度（CTCAE分级） 注射部位红斑 64 1级（44%），2级（20%） 疲劳 52 1级（100%） 淋巴细胞减少 16 1级（100%）
2. 免疫原性与T细胞应答
通过IFN-γ ELISpot检测，84%（21/25）的患者诱导出KRAS突变特异性T细胞反应，其中高剂量组（≥4剂）应答率达100%。单细胞TCR测序进一步揭示：
- 克隆多样性：平均每个患者检测到12个KRAS特异性TCR克隆（范围5-28）
- 记忆表型：中央记忆T细胞（Tcm）占比从基线3.2%升至治疗后21.5%
- 功能性验证：体外杀伤实验显示，诱导的T细胞可特异性裂解KRAS突变肿瘤细胞（裂解率68±12%）
表2 免疫应答动力学分析
指标 基线水平 治疗后峰值 变化倍数 IFN-γ分泌细胞（/10^6 PBMC） 12±4 158±34 13.2× KRAS特异性TCR克隆数 2.1±1.3 18.7±5.6 8.9× PD-1+CD8+ T细胞比例 8.5%±2.1% 24.3%±6.7% 2.9×
3. 肿瘤生物标志物与生存获益
治疗后12周，24%（6/25）的患者实现ctDNA完全清除（定义为连续2次检测阴性），另有32%（8/25）的ctDNA水平下降>50%。中位随访16.3个月时：
- 无复发生存期（RFS）：16.33个月（95% CI 12.1-21.4），显著优于历史对照（8-10个月）
- 总生存（OS）：未达到，12个月生存率92%
- 应答相关性：ctDNA清除组RFS未达到，非清除组为9.8个月（HR 0.21, p=0.002）
机制探讨与临床转化路径
本研究的成功得益于以下机制突破：
- 淋巴结靶向递送：两亲性结构使疫苗通过淋巴管快速富集至淋巴结，APC摄取效率较传统肽疫苗提升7倍 ；
- 表位扩展效应：除靶向G12D/G12R外，35%的患者出现针对其他KRAS突变（如G12V）的交叉反应；
- 免疫记忆形成：治疗后6个月仍可检测到KRAS特异性T细胞，提示疫苗诱导了长效免疫记忆。
基于此，研究者提出三步走转化策略：
- 扩大适应症：启动II期试验（NCT055XXXX），纳入晚期PDAC和CRC患者；
- 联合治疗探索：与PD-1抑制剂或KRAS G12D抑制剂（如MRTX1133）联用，破解肿瘤免疫抑制微环境；
- 个体化疫苗开发：基于患者特异性KRAS突变谱定制多肽组合。
技术局限与未来方向
尽管数据积极，仍需关注以下挑战：
- 生物标志物优化：当前ctDNA检测灵敏度（0.01%）可能低估MRD状态，需结合肿瘤个性化分析（TPD）技术；
- 免疫逃逸机制：部分患者出现MHC-I下调，提示需联合表观遗传调节剂（如HDAC抑制剂）；
- 生产标准化：两亲性肽的合成与质控标准需进一步统一以确保批次间一致性。
未来研究将聚焦于：
- 空间多组学分析：通过CODEX技术解析疫苗诱导的肿瘤免疫微环境重塑；
- AI预测模型：开发机器学习算法预测TCR克隆扩增轨迹；
- 全球多中心验证：在亚洲人群中验证疗效（当前队列均为欧美患者）。
结论：改写KRAS突变肿瘤治疗范式的里程碑
ELI-002 2P的I期数据首次证实，通过合理设计的淋巴结靶向疫苗可在KRAS突变患者中诱导强效且持久的特异性免疫应答。其独特的两亲性递送系统与多表位覆盖策略，为实体瘤新抗原疫苗开发提供了范式参考。随着后续研究的推进，该疗法有望成为PDAC和CRC综合治疗体系的核心组分，实现从“不可成药”到“精准免疫干预”的历史性跨越。
| 名称 | 货号 | 规格 |
| BV421 Mouse Anti-Human CD4(SK3 ) | 566907 | 100Tst |
| Hu CD4 BV421 SK3 25Tst | 565997 | 25Tst |
| APC-H7 Mouse Anti-Human CD3(SK7) | 560176 | 100Tst |
| APC-H7 Mouse Anti-Human CD3(SK7) | 560176 | 100Tst |
