标签蛋白纯化填料解决方案

1. 背景介绍

Ni-IDA Pharose FF 是含亚氨基二乙酸（iminodiacetic acid，IDA）基团的金属螯合填料，以琼脂糖微球为基质，通过活化偶联亚氨基二乙酸（IDA），再螯合Ni2+。适用于大部分带组氨酸标签（His-tag）蛋白的亲和层析。

Ni-NTA Sepharose FF 是含次氮基三乙酸（NTA）基团的金属螯合填料，以琼脂糖微球为基质，通过活化偶联次氮基三乙酸（NTA），再螯合Ni2+。与亚氨基二乙酸（IDA）相比，具有更好的螯合剂、还原剂、碱性的耐受性。主要用于带组氨酸标签（His-tag）蛋白的亲和层析。

1.1 Ni-IDA 琼脂糖凝胶FF系列使用流程图

1.2 Ni-NTA 琼脂糖凝胶FF系列使用流程图

2. 标签蛋白纯化填料参数

类别	Ni-IDA 琼脂糖凝胶FF	Ni-NTA 琼脂糖凝胶FF
基质	6%交联琼脂糖
配基	亚氨基二乙酸，~30 μmol Ni₂+/mL	次氮基三乙酸，~17 μmol Ni₂+/mL
粒径范围	45~165 μm
平均粒径	~90 μm
动态结合载量	≥40 mg/mL 带组氨酸标签蛋白
推荐工作流速	60~300 cm/h
最大流速与压力	＞1500 cm/h，0.5 MPa
使用 pH	4~8.5（推荐的工作 pH），3~12（长期稳定）；2~14（短期稳定）
化学稳定性	在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液、1 mol/L 氢氧化钠、8 mol/L 尿素、6 mol/L 盐酸胍、70%乙醇等。

注：
a：90%体积以上的微球在此粒径范围；
b：DBC10%测试条件为：10%流穿，大肠杆菌表达带组氨酸标签的重组蛋白，6 min 停留时间；

3. 应用数据：

图6：Lane M： Marker
Lane 1 ：Start material
Lane 2: Flowthrough 1
Lane 3: Flowthrough 2
Lane 4: Elution (20 mM Imidazole)
Lane 5: Elution (50 mM Imidazole)
Lane 6: Elution (100 mM Imidazole)
Lane 7: Elution (200 mM Imidazole)
Lane 8: Elution (300 mM Imidazole)
Lane 9: Elution (500 mM Imidazole)
填料： Ni-IDA 琼脂糖凝胶FF（重力预装柱）（Cat: abs91007-G），1mL
样品：his6 -tagged recombinant Streptococcus Protein G produced in E. coli
结合缓冲液：20 mM PB, 150 mM NaCl, pH 7.4
洗脱缓冲液：20 mM PB, 150 mM NaCl, 20-500 mM Imidazole, pH 7.4

图7：填料：Ni-NTA 琼脂糖凝胶FF（中压预装柱）（Cat: abs91008-M），1mL
样品：his6 -tagged recombinant Streptococcus Protein G produced in E. coli
结合缓冲液：20 mM PB, 150 mM NaCl, pH 7.4
洗脱缓冲液：20 mM PB, 150 mM NaCl, 20-500 mM Imidazole, pH 7.4

表3. NTA系列⾦属螯合填料的耐受性

4.爱必信标签蛋白纯化填料产品信息

货号	产品名称	规格
abs91007-F	Ni-IDA 琼脂糖凝胶FF	10mL/100mL
abs91007-M	Ni-IDA 琼脂糖凝胶FF（中压预装柱）	1mL/5mL
abs91007-G	Ni-IDA 琼脂糖凝胶FF（重力预装柱）	1mL/5mL
abs91008-F	Ni-NTA 琼脂糖凝胶FF	10mL/100mL
abs91008-M	Ni-NTA 琼脂糖凝胶FF（中压预装柱）	1mL/5mL
abs91008-G	Ni-NTA 琼脂糖凝胶FF（重力预装柱）	1mL/5mL