THUNDERTM TR-FRET由加拿大Bioauxilium公司研发,THUNDER™产品均提供全面验证数据。其产品线聚焦于细胞水平的检测,如细胞信号通路相关的细胞因子,磷酸化蛋白,总蛋白,GPCR相关第二信使cAMP检测等,也涉及适合方法学开发的工具抗体。
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一、THUNDERTM 细胞因子检测试剂盒
THUNDER检测细胞因子采用经典双抗夹心模型,信号强度与细胞因子浓度成正比。取15μl样本或标准品,加入空的微孔板中,再加入5μl的抗体Mix(供体抗体,受体抗体各2.5μl),孵育2h,酶标仪读值。
图1:THUNDER细胞因子检测原理图
热门细胞因子/生物标志物检测试剂盒
Human | |||||
IL-1α | IL-10 | IL-18 | CCL3/MIP1α | TNFα | Insulin |
IL-1β | IL-11 | IFNα | CCL4/MIP-1β | GM-CSF | Fibronectin |
IL-2 | IL-12/IL-23 p40 | IFNβ | CCL17/TARC | MMP-3 | COL1A1 |
IL-4 | IL-12 p70 | IFNγ | CXCL1/GROα | MMP-7 | PD-L1 |
IL-6 | IL-17A | CCL2/MCP1 | CXCL9/MIG | VEGF | Human IgG (Fc) |
IL-8/CXCL8 | CHO HCP | ||||
Mouse | |||||
IL-1α | IL-2 | IFNγ | CCL2/MCP1 | VEGF | Rabbit IgG (Fc) |
IL-1β | IL-6 | IFNβ | TNFα | CCL17 | Mouse IgG |
*试剂盒提供:100 points,500 points,2500 points,5000 points,10000 points
二、THUNDERTM 磷酸化/总蛋白检测试剂盒
THUNDER检测胞内磷酸化蛋白采用经典双抗夹心模型,信号强度与胞内蛋白磷酸化水平成正比。
第一步:细胞处理,需5分钟或过夜,激动剂/抑制剂处理细胞;
第二步:细胞裂解,15~60分钟;
第三步:检测,加检测抗体对,孵育1小时或过夜,酶标仪检测。
图2:THUNDER磷酸化/总蛋白检测原理图
热门磷酸化与总蛋白试剂盒
Name | ||
4EBP1 (T37/T46) | ERK1/2 Total | p7056K (T389) + Total p7056K |
4EBP1 Total | ERK1/2 (T202/Y204) + Total ERK1/2 | RPS6 (S235/S236) |
4EBP1 (T37/T46) + Total 4EBP1 | GSK3β (S9) | RPS6 Total |
AKT1/2/3 (S473) | GSK3β Total | RPS6 (S235/S236) + Total RPS6 |
AKT1/2/3 (T308) | GSK3β (S9) + Total GSK3β | RPS6 (S240/S244) |
AKT1/2/3 Total | IRβ (Y1150/Y1151) | RPS6 (S240/S244) + Total RPS6 |
AKT1/2/3 (S473) + Total AKT1/2/3 | JNK1/2/3 (T183/Y185) | SLP-76 (S376) |
AKT1/2/3 (T308) + Total AKT1/2/3 | JNK1/2/3 Total | SLP-76 Total |
BAD (S112) | JNK1/2/3 (T183/Y185) + Total JNK1/2/3 | SLP-76 (S376) + Total SLP-76 |
BTK (Y223) | LCK (Y394) | SMAD2 (S465/S467) |
BTK Total | MEK1 (S218-S222) | SRC (Y419) |
BTK (Y223) + Total | MEK1 Total | STAT1 (Y701) |
CREB (S133) | MEK1 (S218-S222) + Total MEK1 | STAT3 (Y705) |
CREB Total | Met (Y1234/Y1235) | STAT3 Total |
CREB (S133) + Total CREB | Met Total | STAT3 (Y705) + Total STAT3 |
EGFR (Y1068) | Met (Y1234/Y1235) + Total Met | STAT4 (Y693) |
EGFR Total | NFκB (S536) | STAT5 (Y694/Y699) |
EGFR (Y1068) + Total EGFR | NFκB Total | STAT5 Total |
eIF2α (S51) | NFκB (S536) + Total NFκB | STAT5 (Y694/Y699) + Total STAT5 |
eIF2α Total | p38α (T180/Y182) | STAT6 (Y641) |
eIF2α (S51) + Total eIF2α | p38α/βγ (T180/Y182) | STAT6 Total |
eIF4E (S209) | p53 (S15) | STAT6 (Y641) + Total STAT6 |
eIF4E Total | p53 Total | SYK (Y525/Y526) |
eIF4E (S209) + Total eIF4E | p53 (S15) + Total p53 | SYK Total |
Extreme ERK1/2 (T202/Y204) | p70S6K (T389) | TBK1 (S172) |
ERK1/2 (T202/Y204) | p70S6K Total | GAPDH Total |
*试剂盒提供:100 points,500 points,2500 points,5000 points,10000 points
三、THUNDERTM cAMP检测试剂盒
THUNDER cAMP试剂盒采用竞争法检测,信号呈现倒S曲线,与cAMP浓度成反比。首先进行细胞培养处理(给药处理),细胞裂解后依次加入cAMP和检测抗体对,孵育1小时,使用酶标仪进行检测。
图:THUNDER cAMP检测原理图
THUNDER cAMP检测试剂盒
Name | 1000 tests | 5000 tests | 20000 tests |
cAMP | KIT-CAMP-1000 | KIT-CAMP-5000 | KIT-CAMP-20000 |
四、THUNDERTM ToolBox检测试剂
THUNDERTM TR-FRET技术检测PPI时,一种蛋白被标记(直接标记或间接)有供体,另一种蛋白被标记(直接标记或间接)有受体,当两种蛋白相互作用时,供体分子与受体分子的位置接近,供体将产生与蛋白-蛋白相互作用成正比的信号。
PROTAC通过linker将靶蛋白(POI)和E3连接酶拉进,进而靶蛋白被蛋白酶体降解,检测生化水平的结合,也可以建立TR-FRET三元复合物模型。
图:THUNDER PPI实验模型示意图
图:THUNDER PROTAC/分子胶 三元模型示意图
相关抗体及缓冲液
Donor(Eu荧光供体) | Accptor(FR荧光受体) | Buffer |
Eu-anti-6xHis | FR-anti-6xHis | Detection Buffer (10X) |
Eu-anti-c-Myc | FR-anti-c-Myc | |
Eu-anti-FLAG | FR-anti-FLAG | |
Eu-anti-GST | FR-anti-GST | |
Eu-anti-V5 | FR-anti-V5 | |
Eu-anti-human IgG | FR-anti-human IgG | |
Eu-anti-mouse IgG | FR-anti-mouse IgG | |
Eu-anti-rabbit IgG | FR-anti-rabbit IgG | |
Eu-streptavidin | FR-streptavidin |
*试剂提供:1000 points,5000 points,20000 points,Buffer提供:2ml,10ml和100ml。