聚合酶链式反应（PCR）
一、PCR技术概述
聚合酶链式反应（PCR）是一种用于体外扩增特定DNA片段的分子生物学技术。其核心原理基于DNA的半保留复制机制，通过特定的酶在体外快速扩增DNA片段。PCR技术自1983年由Kary Mullis首次提出设想，并于1985年正式发明以来，已成为基因克隆、疾病诊断、法医鉴定等领域的关键工具。
二、PCR技术的发展历程
早期设想：1971年，Kjell Kleppe和Gobind Khorana首次提出了核酸体外扩增的设想，但由于当时技术限制，该设想未能实现。
发明与突破：1985年，Kary Mullis发明了PCR技术，并于1987年获得专利。1988年，Taq DNA聚合酶的发现使得PCR技术能够自动化进行。
商业化与推广：1988年，Taq酶被商业化推广，随后PCR仪的出现进一步推动了PCR技术的普及。
技术改进：1991年，Pfu DNA聚合酶的发现进一步提高了PCR的准确性和可靠性。2003年，Phusion DNA聚合酶的推出标志着新一代PCR技术的诞生。
三、PCR技术的原理
PCR过程主要由三个基本反应步骤构成：
变性：模板DNA在93℃左右加热一定时间后，双链DNA的氢键断裂，双链解离为单链。
退火：温度降至55℃左右时，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。
延伸：在72℃左右，DNA聚合酶沿着模板链延伸，引物的3'端逐步合成新的DNA链。
通过重复循环变性、退火和延伸三个过程，可以获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2-4分钟，2-3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
四、PCR技术的应用
基因表达分析：通过PCR可以检测不同细胞类型、组织和生物体在特定时间点的基因表达差异。
基因分型：用于检测特定细胞或生物体中等位基因的序列差异。
克隆：PCR被广泛应用于目标DNA片段的克隆。
突变检测：通过PCR可以引入或检测基因中的突变。
甲基化分析：用于研究位点特异性甲基化。
测序：PCR是为测序富集模板DNA的一种相对简单的方法。
疾病诊断：PCR及其相关技术适用于病毒、细菌、寄生虫等所有病原体的检测。
法医鉴定：PCR技术在法医学中被广泛应用于人类身份鉴定。
五、PCR技术的常见问题及解决方法
没有扩增产物：可能的原因包括循环温度设置不当、引物设计不合理、DNA聚合酶活性不足、抑制性成分的存在以及DNA样品问题。
非特异产物及电泳呈涂布状：可能的原因包括Mg2+浓度过高、引物、模板、聚合酶的用量不合理、循环数过多、退火温度过低或延伸时间过长。
引物二聚体的形成：可能的原因包括引物序列设计不当、退火温度过低、引物与模板浓度比例不当以及引物长度不足。
六、PCR技术的未来发展方向
随着DNA聚合酶的不断改进和新技术的不断涌现，PCR技术在遗传学、医学和生物技术领域的应用前景将更加广阔。新一代聚合酶和高保真PCR技术的发展，使得PCR扩增更快速、更可靠和更准确。此外，实时和数字PCR技术的结合为科学研究和医疗保健领域的重大进步做出了贡献。总之，PCR技术自发明以来，已成为分子生物学研究和应用中不可或缺的工具。其高灵敏度、特异性和快速性使其在基因克隆、疾病诊断、法医鉴定等多个领域得到了广泛应用。随着技术的不断进步，PCR技术将在未来继续为生命科学研究和应用提供强大的支持。
| 名称 | 货号 | 规格 |
| 200uL PCR 8连管（带盖） | abs42078408-50mg | 50mg |
| 2×Taq PCR Mix | abs60036-1mL×20 | 1mL×20 |
| 2×HotStart Taq PCR Mix with Loading Dye | abs60032-1mL×5 | 1mL×5 |
| PCR & DNA 片段纯化试剂盒 | abs60167-50T | 50T |
