shRNA
shRNA 是 “short hairpin RNA”（短发夹 RNA）的缩写。它包含两个短反向重复序列，克隆到 shRNA 表达载体中的 shRNA 由这两个短反向重复序列以及中间的茎环（loop）序列组成，形成发夹结构，该结构受 polⅢ启动子调控，并在后续连上 5 - 6 个 T 作为 RNA 聚合酶Ⅲ的转录终止子。
在活体中输送 “小干扰 RNA”（siRNA）的一种方法是，将 siRNA 序列作为 “短发夹” 克隆至质粒载体。当其被送入动物体内后，发夹序列得以表达，形成 “双链 RNA”（dsRNA），进而被 RNAi 通路处理。然而，有研究对成年小鼠肝脏中 shRNA 表达的长期效应进行了探讨，结果为相关研究敲响了警钟。研究表明，许多在小鼠中表达的 shRNA 具有毒性，这种毒性常为致命性，似乎源于 shRNA 与内源性微 RNA 为竞争结合 Exportin - 5（Exportin - 5 是参与将分子转运出细胞核的因子）而产生的相互作用。尽管人们对于开发基于 shRNA 的疗法兴趣浓厚，但此前几乎未有证据显示 shRNA 在活体中具有如此显著的毒性。
shRNA 真核表达载体 pYrbio-LT-1 质粒图谱相关要点如下：
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克隆至 shRNA 表达载体中的 shRNA，包含两个短反向重复序列，二者被一茎环（loop）序列分隔，构成发夹结构，受 pol Ⅲ 启动子调控，其后连接 5 - 6 个 T，以充当 RNA 聚合酶 Ⅲ 的转录终止子。
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两个互补的寡核苷酸，其两端应带有限制性酶切位点。
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Stratagene 的研究发现，相较于之前推荐的 23 个寡核苷酸，29 个寡核苷酸能更高效地抑制目的基因。
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在启动子下游的酶切位点下方紧邻一个 C，此举旨在使插入片段与启动子之间形成一定空间间隔，从而保障转录过程的顺利启动。
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shRNA 目的序列的首个碱基必需为 G，以确保 RNA 聚合酶能够正常转录。倘若所选目的序列不以 G 开头，则需在正义链的上游紧邻处添加一个 G。
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shRNA 插入片段中的茎环应靠近寡核苷酸的中部位置。不同大小及核苷酸序列的茎环均已被成功应用。其中，含有独特限制性酶切位点的茎环，有利于对带有 shRNA 插入片段的克隆进行检测。在众多不同长度与序列的茎环中，5'TCAAGAG3' 序列展现出了最佳效果。
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必须将 5 - 6 个 T 设置在 shRNA 插入片段的尾部，以此确保 RNA 聚合酶 Ⅲ 能够终止转录。
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在正义链和反义链序列上，不可出现连续 3 个或以上的 T，否则可能导致 shRNA 转录的提前终止。
| 名称 | 货号 | 规格 |
| Control shRNA Lentiviral Particles-A | sc-108080 | 200 ul |
| Control shRNA Plasmid-A | sc-108060 | 20μg |
| Dyrk1A shRNA (h) Lentiviral Particles | sc-39007-V | 200 ul |
| UPase shRNA Plasmid (h) | sc-41087-SH | 20μg |
