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抗原肽-MHC结合亲和力定量评估与人群适配性高通量ELISA筛查平台

时间:2025-05-09 17:19:54
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MHC抗原肽多聚体

本技术平台提供抗原肽与HLA-I类分子结合能力的精准评估服务,可高效筛选具有HLA-I限制性呈递潜能的抗原表位。该技术体系已成熟应用于以下领域:肿瘤免疫治疗靶点开发(如肿瘤新生抗原筛选)、个性化肿瘤疫苗制备(含MHC-I多聚体定制合成)、感染性疾病疫苗研发(如病毒特异性T细胞免疫应答监测)等场景。

技术核心原理

在目标抗原肽存在条件下,HLA-I重链与β2微球蛋白(B2M)通过非共价作用组装形成三元复合体,该过程伴随特异性构象重排。采用抗B2M-HRP标记抗体作为检测探针,配合链霉亲和素包被板或抗HLA单克隆抗体固相化系统,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)夹心法实现复合物捕获。通过450nm波长吸光度值定量检测显色反应强度,可建立抗原肽浓度-结合能力标准曲线,实现半定量评估。若待测肽段与HLA-I分子结合亲和力不足或无法诱导稳定构象形成,则检测复合物无法有效锚定于固相载体,经洗涤步骤后HRP信号显著衰减,最终ELISA读数呈阴性反应。该体系通过双重质控(空白对照、阳性肽对照)确保检测特异性,最低检测限可达1nM级别。

应用价值

肿瘤新生抗原筛选:通过量化肿瘤突变衍生肽段的HLA-I类分子呈递效能,建立免疫原性预测模型,辅助筛选具有个体化治疗潜力的肿瘤特异性新抗原;结合患者HLA分型数据,可解析肿瘤免疫逃逸机制中的抗原呈递缺陷环节。

肿瘤疫苗靶点评估:构建覆盖常见HLA等位基因型(如HLA-A02:01、HLA-B07:02等)的高通量筛选平台,实现多肽库的交叉反应性评估与表位亲和力优化,指导肿瘤多肽疫苗的理性设计及免疫原性优化。

肿瘤TCR-T前期靶点验证:基于经验证的抗原肽-MHC复合物,建立临床级MHC多聚体生产工艺,支持从单细胞测序数据到功能性TCR筛选的全流程技术闭环,加速抗原特异性T细胞克隆的体外扩增与亲和力成熟。

病毒抗原肽筛选:针对病毒变异株(如HIV、流感病毒、SARS-CoV-2)开展抗原漂变监测,构建HLA限制性表位数据库,为广谱疫苗设计提供关键表位信息,辅助评估病毒逃逸突变对T细胞免疫应答的影响。

疫苗免疫力评估:通过检测疫苗接种后抗原特异性T细胞的频度与功能表型(如颗粒酶B表达、多功能细胞因子分泌),建立免疫应答质量评估体系,关联体外检测数据与体内保护效力,指导疫苗剂量与接种策略优化。

自身免疫抗原筛选:解析自身免疫性疾病相关HLA风险等位基因(如HLA-B27、HLA-DRB104:01)的异常抗原呈递谱,定位致病性T细胞识别的自身抗原表位,为疾病分型诊断与靶向免疫干预提供分子靶标。

器官移植抗原的筛选:开发供受者HLA错配抗原表位预测算法,建立移植排斥相关间接识别表位库,辅助设计去免疫化供体器官修饰策略及受者特异性脱敏治疗方案,推动移植耐受诱导技术的临床转化。

检测模式

本平台提供三种标准化检测模式,适配不同应用场景下的抗原肽-HLA相互作用研究需求:

抗原肽筛选模式

该模式采用单一HLA等位基因型(如HLA-A*02:01)与多样本抗原肽库进行高通量结合能力评估。通过ELISA夹心法检测体系,可快速筛选出具有HLA结合亲和力的肿瘤新生抗原、病毒变异株表位、自身免疫相关抗原及移植排斥相关抗原。服务流程包含:用户提供多肽库(≥50个序列),我方提供标准HLA单体及检测试剂盒,72小时内完成全流程检测并出具结合活性排序报告。该模式特别适用于肿瘤免疫治疗靶点库构建、病毒逃逸突变监测及自身免疫病机制研究(对应应用价值第1、4、6、7项)。

HLA适配模式

针对已明确的抗原肽序列,通过全谱系HLA等位基因型扫描(覆盖95%以上人群HLA频率),建立抗原肽-HLA结合图谱。采用微阵列芯片技术实现48种常见HLA等位基因型的平行检测,结合生物信息学分析预测人群覆盖率(如计算HLA-DRB1*15:01阳性人群中表位识别率)。该模式为疫苗设计提供关键数据支持,可指导制定区域特异性接种策略或个性化免疫治疗方案(对应应用价值第2、3、5项)。

复合物验证模式

针对已发表文献或专利中的pMHC复合物制备工艺,提供完整的原料验证与工艺优化服务。服务内容包括:

  • HLA重链/β2m突变体结合活性验证
  • 折叠缓冲液配方优化(pH、盐离子浓度梯度筛选)
  • 纯化标签(如生物素-链霉亲和素系统)效能评估
  • 复合物稳定性验证(4℃/37℃加速降解实验)
    通过SDS-PAGE、动态光散射(DLS)及功能验证(T细胞激活实验)多维度质控,确保符合TCR类抗体开发、四聚体染色试剂生产及CAR-T细胞体外扩增等下游应用的质量标准。

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