D-荧光素钾盐（D-Luciferin potassium salt）
发光特性与化学性质
D-荧光素钾盐是萤火虫荧光素酶（Luciferase）的天然底物，参与催化生物发光反应，产生特征性黄绿光（λ_max≈530 nm）。其发光机制依赖于荧光素酶、三磷酸腺苷（ATP）及分子氧的协同作用，通过氧化脱羧反应释放光子，光量子产量与酶浓度呈正相关。该盐类衍生物在生物技术应用中展现出显著优势，尤其适用于活体动物模型的无创成像。
理化参数
- 溶解度：在生理缓冲液（如PBS）中溶解度可达30 mg/mL（约78 mM），远超钠盐形式（约20 mg/mL），适用于高浓度给药方案。
- 物理性状：浅黄色结晶性粉末，纯度≥98%（HPLC）。
- 储存条件：短期使用可于4℃避光保存；长期保存建议置于-20℃以维持化学稳定性，避免反复冻融。
发光反应机理
在荧光素酶催化下，D-荧光素与ATP发生腺苷化反应，生成荧光素腺苷酸（Luciferyl-AMP），随后在分子氧存在下被氧化为氧合荧光素（Oxyluciferin），并释放光子（hν）。反应式如下：
此过程受ATP浓度动态调控，光强变化可间接反映细胞代谢活性或存活状态。
生物技术应用
- 活体生物发光成像（BLI）：
- 通过构建稳定表达荧光素酶的细胞系或转基因动物模型，实现肿瘤增殖、转移及治疗响应的实时动态监测，为药效学评价提供量化指标。
- 信噪比（SNR）较传统荧光成像提升1-2个数量级，检测灵敏度可达10^3细胞级。
- 能量代谢研究：
- 利用ATP依赖性发光特性，构建生物发光传感器，用于线粒体功能评估及缺氧微环境检测。
- 报告基因系统：
- 与Tet-On等诱导表达系统偶联，实现基因表达水平的时空特异性监测，分辨率达组织器官尺度。
技术备注
- 在细胞质基质及体液环境中，D-荧光素以解离态Luc⁻形式存在，其生物利用度不受钾盐/钠盐形式影响。
- 最大发光波长（530 nm）受溶液极性及黏度调控，在活体组织中因光散射效应蓝移至500-510 nm，需配备高灵敏度CCD相机（量子效率>80%@500 nm）进行信号采集。
此化合物已成为生物医学研究中的核心工具试剂，其定量检测能力为疾病模型构建及药物筛选提供了关键技术支撑。
D-荧光素钾盐使用方法
一、体外生物发光检测
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储备液配制
以无菌去离子水溶解D-荧光素钾盐，制备30 mg/mL（78 mM）高浓度储备液（100-200×），充分混匀后分装至无菌EP管，于-20℃避光保存。避免反复冻融操作以维持底物生物活性。 -
工作液稀释
将预热的37℃完全培养基与储备液按体积比（1:100-1:200）混合，终浓度控制在0.15-0.3 mg/mL（3.9-7.8 μM）。此浓度范围可平衡发光强度与细胞毒性，适用于多数贴壁细胞系检测。 -
细胞处理
移除原有细胞培养基，用预热PBS缓冲液（37℃）轻柔漂洗2次，彻底去除残留血清成分。 -
底物孵育与信号采集
每孔加入等体积荧光素工作液，于37℃、5% CO₂培养箱中孵育5-10分钟，使底物充分渗透细胞膜并与胞内荧光素酶结合。随后采用活细胞成像系统（配备500-530 nm带通滤光片）进行动态监测，信号采集间隔≤2分钟以捕捉发光动力学曲线。
二、活体成像分析
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储备液制备
以无菌DPBS缓冲液（不含Mg²⁺/Ca²⁺）溶解D-荧光素钾盐，制备15 mg/mL（39 mM）无菌储备液，经0.2 μm亲水性滤膜（PVDF材质）真空过滤除菌，现配现用或分装后-20℃避光保存。 -
给药方案
按150 mg/kg剂量进行腹腔注射（i.p.），注射体积计算公式：
其中，m为动物体重（kg），V为注射体积（mL）。建议使用胰岛素注射器以确保给药精度。 -
成像窗口期
注射后10-15分钟为最佳成像时段，此时生物发光信号达峰且本底噪声最低。采用异氟烷麻醉系统维持动物镇静状态，通过IVIS Spectrum等小动物活体成像系统进行信号采集，曝光时间设定为1-5分钟以优化信噪比。
技术备注
- 质量控制：推荐使用分析纯（>98%）或HPLC纯化级D-荧光素钾盐，通过紫外-可见分光光度计（λ=330 nm）验证底物纯度，确保摩尔吸光系数（ε=38,000 M⁻¹cm⁻¹）符合理论值。
- 底物稳定性：解冻后的储备液需在4小时内使用完毕，避免因底物氧化导致发光效率下降。
- 数据标准化：采用总光通量（p/s）或平均辐射度（p/s/cm²/sr）进行定量分析，通过Living Image软件进行区域兴趣（ROI）划分及背景扣除。
此标准化操作流程可确保D-荧光素钾盐在生物发光检测中的效能最大化，为分子影像研究提供可靠的定量数据支持。
| 名称 | 货号 | 规格 |
| D-荧光素钾盐 | abs42075819-1g | 1g |
| D-荧光素钾盐 | abs42075819-25mg | 25mg |
| D-Luciferin | abs816138-50mg | 50mg |
| DiR 碘化物 | abs45153692-25mg | 25mg |
