嘿!Naveni PLA 的奇思妙答小课堂开讲啦!
Q1:反应体系怎么选择?
A:应根据样品面积调整反应体积。对于约 1 cm2 的反应面积(通常适用于安装在腔室载玻片上的生长细胞),40 μL 的反应体积是合适的。确保整个样品都被染色溶液覆盖。
反应体系建议
1 cm2 – 40 μl 总反应体积
2 cm2 – 80 μl 总反应体积
3 cm2 – 120 μl 总反应体积
Q2:可以使用塑料玻片吗?
A:可以
Q3:如何选择固定方法?
A:使用一抗获得的染色质量取决于所采用的固定剂类型。理想的固定剂需满足以下条件:
1、维持细胞和组织形态:通过交联作用稳定结构;2、快速终止降解过程(如自溶):抑制内源性酶活性以保护抗原完整性。若抗体说明书未指定特定固定方法,则需根据一抗特性、检测对象(细胞/组织类型)及目标蛋白性质优化固定方案。
Naveni®系列产品与所有常规IHC/IF固定剂兼容,例如:
乙醇、丙酮、锌、多聚甲醛(注意:每次测定必须测定PFA浓度)、福尔马林(10% 缓冲甲醛)
Q4:Naveni®系列产品推荐使用哪些抗原修复/透化方法?
A:(FFPE) 组织切片通常使用两种主要的抗原修复方法:热诱导表位修复 (HIER) 和蛋白水解诱导表位修复 (PIER)。这两种方法都与所有 naveni 产品兼容。对于HIER,可能需要优化溶液的pH值。
Q5:如何设置对照
A:阴性对照:对于 NaveniFlex、Naveni® TriFlex Cell 和 NaveniBright,我们建议通过逐一省略每个一抗来设置阴性对照。此操作可帮助判断 Navenibodies(二抗/检测试剂)是否与您的一抗存在非特异性结合。
阳性对照:1、使用两种靶向已知存在相互作用蛋白的抗体(例如:同一信号通路中的上下游分子)。2、若条件允许,可选用两种识别同一蛋白不同表位的抗体(需确保表位无空间位阻)。
Q6:Naveni® 产品与哪些物种兼容?
A: Naveni® 产品针对人体组织样品的使用进行了优化。它们可能与其他物种的组织相容,但 Navinci Diagnostics 不能保证染色成功。
Q7:如何选择抗体?
A:一抗需为 IgG 类抗体,且特异性识别目标蛋白,建议选择亲和纯化抗体,可选用 多克隆抗体或单克隆抗体。在使用 NaveniFlex 或 NaveniBright 检测前,必须通过免疫荧光(IF)或免疫组化(IHC)验证抗体性能,确保其适用性。
抗体种类:MR 试剂盒需要 1 种小鼠抗体和 1 种兔抗体。
Q8:一抗需要优化滴定吗?
A:需要进行滴定以确定每个抗体的最佳稀释度,在保持背景最低的同时产生最多的分离信号。从您之前 IF 或 IHC 实验的抗体浓度(如果适用)或抗体数据表中推荐的浓度开始。对阳性和阴性对照进行抗体滴定。
Q9:NaveniFlex Cell 可以量化邻位信号吗?
A:可以,NaveniFlex Cell 检测会生成点状信号,只要目标蛋白不过度表达,每个点都可以计为一个独立物体。我们建议通过以下两种方式进行定量分析:一种是测量每个独立通道中每个细胞的强度;另一种是对点状信号进行对象分割和对象计数。可以通过确定细胞核的数量来计算细胞数量,因此请记住按照试剂盒说明书的建议包含一种核染料。
相关产品:
货号 |
产品名称 |
描述 |
NaveniFlex Cell MR RED |
适用于细胞样本,鼠兔一抗,带有Red/Atto647荧光基团 |
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NaveniFlex Cell MR Atto647N |
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NaveniFlex Tissue MR RED |
适用于组织样本,鼠兔一抗,带有Red/Atto647荧光基团 |
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NaveniFlex Tissue MR Atto647N |
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NaveniBright HRP |
适用于细胞,组织样本,鼠兔一抗明场下检测 |
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Naveni TriFlex Cell MR |
适用于细胞样本,鼠兔一抗,检测和定量总蛋白 A、总蛋白 B 以及两种蛋白之间的相互作用 AB。 |
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NaveniLink |
寡核苷酸偶连试剂盒 |
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Naveni PD1/PD-L1 HRP |
PD-1/PD-L互作试剂盒,明场检测 |
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Naveni PD1/PD-L1 Atto647N |
PD-1/PD-L互作试剂盒,带有Atto647荧光团 |
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Naveni CD8/MHCI Atto647N |
CD8/MCHI互作试剂盒,带有Atto647荧光团 |
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Naveni Bright BOND RX HRP |
适用于FFPE组织或细胞切片, 搭配BOND RX/RXm ,实现自动化检测蛋白质相互作用或蛋白质修饰 |
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Naveni PD1 PD-L1 BOND RX HRP |
搭配BOND RX/RX m ,实现自动原位可视化 PD1/PD-L1 的相互作用。明场下检测。 |
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NaveniFlexTM BOND RX RED |
搭配 BOND RX/RXm ,通过 Naveni® 原位技术检测蛋白质、蛋白质-蛋白质相互作用或蛋白质修饰。使用Red/Atto647N 荧光基团进行检测。 |
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NaveniFlexTM BOND RX Atto647N |
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Naveni PD1/PDL1 BOND RX RED |
搭配BOND RX/RX m ,实现自动原位可视化 PD1/PD-L1 的相互作用。使用Red/Atto647N 荧光基团进行检测。 |
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Naveni PD1/PDL1 BOND RX Atto647N |
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NaveniPlex |
可同时检测 PD-1/PD-L1、CD8/MCH1的互作以及CD3。适用于FFPE组织样本。 |
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S-RMab® PD-1 Recombinant Mouse mAb (SDT-R143) |
PD-1重组鼠抗,应用IHC-P,ICFCM,ICC,WB,IP |
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PD-1 Recombinant Rabbit mAb (SDT-035-25) |
PD-L1重组兔抗应用IHC-P |