BSA残留检测试剂盒

产品背景：
牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，BSA）是牛血清中的一种球蛋白，在生化实验中有广泛的应用，例如 BSA 经常作为稳定剂，用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中，起到“保护”或“载体”作用，不少酶类添加 BSA 后能使其活性大幅度提高。其次，BSA 可以减少非特异性结合，常在 Western-blot 与 ELISA 中作为封闭剂使用。
诸如部分抗体药物、疫苗药物以及 CGT 药物等生物制品在生产过程中会使用到胎牛血清，其中就包含了一定量的BSA。BSA 作为外源性蛋白，如果跟随药物产品进入人体，可能引发免疫反应或影响药物效果，所以在 2020 版《中国药典》第三部中，规定了部分人用疫苗中 BSA 的检测要求：对于原液检定，应不高于 50ng/mL，对于成品检定，应不高于 50ng/剂。

反应原理：
本试剂盒应用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术测定样品中BSA的微量残留。用捕获抗体包被 96 孔酶标板，制成固相抗体，随后加入标准品和检测样品，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成一个固相抗体-BSA-检测抗体的三明治结合物，反应结束后洗涤，然后加入底物进行显色反应，底物在 HRP 的催化下由无色转变成蓝色，并在终止液的作用下转变成最终的黄色。在 450nm 和 630nm波长下测定其吸光度值（OD 值），其中 630nm 为校正波长。OD 值与样本中的 BSA 含量呈正相关。

分析方法验证指导：
1、依据《中国药典》指导原则<9101>、<9012>、<9401>以及 ICH<Q2>中关于分析方法验证的相关规定，建议所有使用该试剂盒的实验室做杂质测定的以下几个指标的验证：专属性、准确度、精密度、检测限（选做）、定量限、线性、范围、耐用性。
2、在做 BSA 原料线性验证时，建议将 BSA 原料稀释到试剂盒线性范围内再进行测定，按照一定比例稀释为至少 5 个浓度，检测浓度与稀释倍数呈线性相关。
3、专属性应针对工艺中存在的其他物质进行相关验证。建议釆用高浓度与低浓度质控样品，加入递增浓度的相关干扰物质进行特异性考察。未加入分析物的基质也应同时被测量。质控品的准确度应在一定范围内，且未加入分析物的基质的测量值应低于定量下限。
4、样品的准确度（加标回收率）可以参考《体外诊断试剂分析性能评估（准确度-回收实验）技术审查指导原则》。

产品性能指标：
1、检测限：＜0.5ng/mL
2、定量限：0.5ng/mL
3、线性范围：0.5-32ng/mL
4、准确度（加标回收率）：70%-130%
5、准确度（测量偏差）：≤15%
6、重复性（批内差）：≤10%

特异性：
验证的样本类型具有一定的局限性，建议每个用户在类似的实验中测试其样品基质中的已知物质的交叉反应性。

抗生素	交叉反应率
马血清	＜1%
兔血清	＜1%
胶原酶Ⅰ型	＜1%
半胱氨酸	＜1%
核酸酶	＜1%
胰蛋白酶类似物	＜1%

1、BSA检测较易受到干扰，对实验环境要求较高，需保证环境中无称量作业。
2、测定 BSA 含量的容器及耗材应专用，防止实验室中 BSA 污染。
3、移液器专用或者使用有滤芯枪头。
4、本试剂盒本底值（即未校正前的 OD0ng/mL）一般不大于 0.2，如出现本底值大于 0.2，需要对环境、器皿、耗材等进行排查，也可使用未开封的瓶装娃哈哈水进行水质排查。
5、试剂盒内所有组分都必须恢复至室温（20-25℃）后方可使用。
6、各组分使用前需充分混匀，以保证试剂的均一性，标准品还需短暂离心 5s，将管壁及盖子上的液体全部集中于管底，使用后立即将所有试剂放回 2-8℃。
7、试剂盒必须在有效期内使用，每次试验均需制备相应的标准曲线，不建议不同批次的相关试剂混批使用。
8、酶标板加液时注意不要触碰到微孔板底部，防止破坏包被层。不同样本和步骤间及时更换加样槽和吸头，避免交叉污染。
9、板条洗涤后拍干时，注意防止板条脱落，封板膜注意不能重复使用。
10、待测目标残留浓度过高时，在显色时可能会产生黑色絮状物，此时需要将样品进行一定程度稀释后再检测。
11、读数时注意核对检测波长及拟合方程选择是否正确。
12、只有严格遵守说明书的操作方法，全部使用本试剂盒配套的试剂才能保证最佳检测效果。
13、检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板技术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。
14、本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。
15、本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断。

牛血清白蛋白残留检测试剂盒