快速内切酶PmeI

        快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。所有快速内切酶在通用的 CutOne  或 CutOne  Color  Buffer 中都具有优良的活性，能够在 5~15 分钟内完成酶切。此外，去磷酸化、连接试剂在 CutOne Buffer 中均具有 100% 活性， 支持一管化反应，提升“酶切 - 修饰 - 连接”的体验。
        CutOne  Color Buffer 包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。CutOne  Color Buffer 的红色染料与 2500 bp 双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与 10  bp 双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近。
识别位点：
5‘...G T T T ↓ A A A C...3‘
3‘...C A A A ↑ T T T G...5‘
产品组成：

建议反应条件:
1 × CutOne 缓冲液；
37℃温育；
参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件：
80℃温育 20 min。

质量控制：
功能活性检测
37℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反应体系中，1 μl PmeI 能够在 15 min 内完全消化 1 μg λDNA。
超长时间温育检测
37℃下，在 20 μl 通用 CutOne  反应体系中，将 1 μl PmeI 与 1 μg λDNA 共同温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
酶切 - 连接 - 再酶切检测
37℃下，使用 10 倍酶量的 PmeI 消化 DNA 底物，  回收酶切产物，在 22 ℃ 下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将超过 95% 的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开 95% 以上的连接产物。
蓝白斑检测
使用 1 μl PmeI 消化含有 lacZα 基因且仅在该基因上具有 1 个酶切位点的特定载体。将酶切产物重新连接后转化到大肠 杆菌感受态细胞中，涂布在含有 X-gal、IPTG 和相应抗生素的 LB 平 板培养基上生长。成功连接的 β - 半乳糖苷酶基因可以正确表达，并生长出蓝色菌落；而因酶切末端降解等原因未能重新连接的产物将得到白色菌落。对于限制酶而言，白色菌落的比例应当小于 1%。