UA-Glo®BRET Intracellular TE Substate/Inhibitor

UA-Glo® BRET细胞内TE底物和抑制剂包括友波生物专有的微荧光素酶底物和微荧光素酶抑制剂，可以用来检测微荧光素酶 (NanoLuc®, NLuc) 融合靶标蛋白在细胞内和化合物的结合 (Target Engagement, TE)。在NanoBRET® TE实验设计中，NLuc融合靶标蛋白为NanoBRET®的能量供体，靶标蛋白特异性结合示踪剂为能量受体。NLuc融合靶标蛋白的NLuc催化微荧光素酶底物反应产生的光能可以被位于附近与靶标蛋白结合的示踪剂吸收，而示踪剂激发后发出的光可被定量检测。当测试化合物可以和靶标蛋白结合，并且和示踪剂存在竞争关系时，与靶标蛋白结合的示踪剂将减少，其激发的光能相应减弱，定量检测示踪剂激发的光能强弱可以定量计算测试化合物和靶标蛋白在细胞内的结合程度。同时检测NLuc发光值并计算示踪剂和NLuc发光值的比值可以排除实验误差和背景对检测的影响，极大提高了检测灵敏度。检测时和微荧光素酶底物同时加入的微荧光素酶抑制剂不能进入细胞，但可以抑制细胞外可能存在的NLuc融合靶标蛋白的微荧光素酶活性，从而进一步提高了检测灵敏度。