生物素琼脂糖凝胶FF（中压预装柱）

   Streptavidin NUPharose FF是将链霉亲和素（Streptavidin）和爱必信NUPharose琼脂糖凝胶偶联而成的生物亲和层析分离介质。该填料基于链霉亲和素与生物素的特异性结合实现从生物样品或混合物中分离纯化生物素或生物素化的抗原、抗体、核酸等物质，使用场景主要有以下三类：
1、直接纯化或富集生物素化的生物分子，链霉亲和素与生物素的结合力非常强，一般需要变性条件下才能将其分离，此时样品或配基易失活。
2、纯化抗原或抗体。将生物素化的抗体结合在填料上，利用抗原抗体的亲和特性纯化无生物素化的抗原，抗原洗脱时抗体不会被洗脱。反之亦可。
3、纯化2-亚氨基生物素（2-iminobiotin）标记的生物分子。链霉亲和素与2-亚氨基生物素的结合相对生物素较弱，在pH 9.5~11.0条件下结合，在pH=4.0的非变性条件下洗脱，不影响样品的活性和凝胶的活性。

   如上所述，Streptavidin NUPharose FF填料是在NUPharose琼脂糖凝胶微球骨架上修饰链霉亲和素而成（图1a）。链霉亲和素是同一亚基组成的四聚体蛋白，可特异性结合D-生物素以及D-生物素标记物质（图1b，c）。链霉亲和素与D-生物素之间的亲和力非常高，其解离常数在10⁻¹⁴ mol/L数量级，是自然界最强的非共价相互作用之一。因而Streptavidin NUPharose FF填料与生物素标记物质结合后，需要在变性条件下洗脱。在该使用方式下，样品易失活，填料的性能也受影响。
   得益于链霉亲和素配基与D-生物素之间的高亲和力，结合在Streptavidin NUPharose FF填料上的生物素标记抗体可以捕获相应的抗原物质（图2），抗体-抗原复合物可以在pH=3左右的酸性条件下解离，从而得到纯化的抗原物质，填料可以重复使用多次。另外，如果是生物素标记的抗原物质与填料结合，则可以用来富集和纯化相应的抗体。
   亚氨基生物素是一种生物素类似物，亚氨基生物素与链霉亲和素之间的结合有着pH依赖性。在碱性条件下，亚氨基生物素与链霉亲和素的解离常数在10⁻¹¹ mol/L数量级，尽管比D-生物素与链霉亲和素的解离常数高2~3个数量级，亚氨基生物素与链霉亲和素的亲和力仍非常高，在pH 9~11条件下，Streptavidin NUPharose FF可结合亚氨基生物素标记物质；在pH 3~4的酸性条件下，亚氨基生物素被质子化，亚氨基生物素与链霉亲和素的解离常数在10⁻³ mol/L数量级，即链霉亲和素与亚氨基生物素之间的结合可在pH=4的酸性条件下解离，因而Streptavidin NUPharose FF填料在纯化亚氨基生物素标记物质时，可在温和的条件下洗脱（图3）。图1. Streptavidin NUPharose FF填料的结构示意图（a），填料与D-生物素（b）、D-生物素标记物质（c）的特异性结合。

图2. Streptavidin NUPharose FF填料纯化抗原的过程示意图

图3. Streptavidin NUPharose FF填料纯化亚氨基生物标记物质