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支原体检测试剂盒（qPCR法）
品牌： Absin
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产品介绍
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产品信息
商品描述
支原体是实验室中常见的污染细胞的原核生物，污染主要来源包括细胞和毒种，以及血清、鸡胚、原代细胞等动物性原材料和操作者本身，据统计约有 15%-35%的细胞被支原体污染。支原体会改变宿主细胞的结构和功能等一系列特征，造成实验结果不准确；干扰细胞代谢和生长，改变核酸合成，影响细胞抗原性，导致染色体改变，干扰病毒复制以及模仿病毒的作用。
本检测试剂盒专一性强，灵敏度高，可用于定性检测主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床治疗用细胞中是否存在支原体污染，可与宿主细胞残留 DNA（磁珠法）样本前处理试剂盒（abs60544）配套使用。
检测原理：
依据《欧洲药典》中<2.6.7>中指出，在适当的验证之后，核酸扩增技术NAT可以代替培养法和指示细胞培养法。荧光探针（TaqMan®）qPCR法具有灵敏度高、特异性强的特点，选用 TaqMan®作为支原体检测的方法。TaqMan®荧光探针是一种寡核苷酸探针，其5’末端携带荧光基团（报告基团），如 FAM、CY5、VIC 等，3’端携带淬灭基团，如TAMRA、BHQ1 等。PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一条特异性的荧光探针，探针完整时，荧光基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收。PCR扩增时，Taq 酶的 5‘－3‘外切酶活性将探针酶切降解，使荧光基团和淬灭基团分离，从而荧光监测系统（荧光定量 PCR 仪）可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR 产物形成完全同步。本试剂盒采用多重 PCR 的方法，用 2 种不同的荧光探针分别检测目标序列与内参。
产品组分：
| 编号 | 名称 | 规格 | 储存条件 |
| 1 | 支原体 Primer&Probe MIX | 120 µL | -20℃及以下避光 |
| 2 | 2×qPCR Reaction MIX | 700 µL | -20℃及以下避光 |
| 3 | Internal Control | 220 µL | -20℃及以下 |
| 4 | Positive Control | 500 µL | -20℃及以下 |
| 5 | DNA 稀释液 | 1.5 mL×3 | -20℃及以下 |
应用
注意事项
（1）本试剂盒已通过稳定性（冻融等因素）的验证，无需分装。
（2）阴性样品（2×qPCR Reaction MIX、Primer&Probe MIX和DNA稀释液等）和阳性样品（PC 和待测样品等）的配制和加样环境需区分区域，不可在一个区域内操作，配制人员需穿戴整齐，戴好口罩、手套和穿好洁净服。
（3）注意在不同加样步骤间及时更换吸头，避免交叉污染，避免长时开盖，使用移液器移液时，需避免液体挂壁。
（4）试剂盒必须在有效期内使用，不建议不同批次的相关试剂混用。
（5）试剂盒内所有组分建议在低温环境融化后使用，且需确保其充分溶解，各组分使用前需充分混匀，以保证试剂的均一性，经混匀的试剂需经短暂离心，以使管壁及盖子上的液体全部集中于管底。若发现DNA 稀释液中有析出物，建议于 37 ℃条件下进行孵育，使DNA 稀释液完全溶解。
（6）只有严格遵守说明书的操作方法，全部使用本试剂盒配套的试剂才能保证最佳检测效果。
（7）最终的试验结果与试剂的有效性、操作者的操作方法及试验环境密切相关。
（2）阴性样品（2×qPCR Reaction MIX、Primer&Probe MIX和DNA稀释液等）和阳性样品（PC 和待测样品等）的配制和加样环境需区分区域，不可在一个区域内操作，配制人员需穿戴整齐，戴好口罩、手套和穿好洁净服。
（3）注意在不同加样步骤间及时更换吸头，避免交叉污染，避免长时开盖，使用移液器移液时，需避免液体挂壁。
（4）试剂盒必须在有效期内使用，不建议不同批次的相关试剂混用。
（5）试剂盒内所有组分建议在低温环境融化后使用，且需确保其充分溶解，各组分使用前需充分混匀，以保证试剂的均一性，经混匀的试剂需经短暂离心，以使管壁及盖子上的液体全部集中于管底。若发现DNA 稀释液中有析出物，建议于 37 ℃条件下进行孵育，使DNA 稀释液完全溶解。
（6）只有严格遵守说明书的操作方法，全部使用本试剂盒配套的试剂才能保证最佳检测效果。
（7）最终的试验结果与试剂的有效性、操作者的操作方法及试验环境密切相关。
背景
别名
支原体 DNA（qPCR）检测试剂盒
技术指标
检测限：
10CFU/mL口腔支原体、猪鼻支原体、肺炎支原体等各国药典提及的10种支原体标准菌株的检出率为100%。
空白限：
将DNA稀释液作为样本直接检测，共计做24次提取并检测，样本均未被检出。
精密度：
对同一份支原体阳性参考品平行测定十次，检测结果均为阳性，Ct值的变异系数≤5%。
专属性：
将常见生物制品（如：Human、Vero、CHO、HEK293、E.coli、毕赤酵母等）300 pg/μL基因组DNA作为样本进行提取检测；其他工程菌（如嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌等）DNA作为样本进行提取检测，均无检出；将PBS、10%胎牛血清等阴性基质作为样本进行提取检测，无检出。
耐用性：
支原体标准菌株在不同稀释基质（如DMEM培养基、CHO无血清培养基等）、产品冻融，产品运输、多种机型改变（如ABI 7500，Bio-Rad CFX Opus96，Roche LightCycler 96 等）情况下均可以稳定检出。
10CFU/mL口腔支原体、猪鼻支原体、肺炎支原体等各国药典提及的10种支原体标准菌株的检出率为100%。
空白限：
将DNA稀释液作为样本直接检测，共计做24次提取并检测，样本均未被检出。
精密度：
对同一份支原体阳性参考品平行测定十次，检测结果均为阳性，Ct值的变异系数≤5%。
专属性：
将常见生物制品（如：Human、Vero、CHO、HEK293、E.coli、毕赤酵母等）300 pg/μL基因组DNA作为样本进行提取检测；其他工程菌（如嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌等）DNA作为样本进行提取检测，均无检出；将PBS、10%胎牛血清等阴性基质作为样本进行提取检测，无检出。
耐用性：
支原体标准菌株在不同稀释基质（如DMEM培养基、CHO无血清培养基等）、产品冻融，产品运输、多种机型改变（如ABI 7500，Bio-Rad CFX Opus96，Roche LightCycler 96 等）情况下均可以稳定检出。
制备和贮存
保存方式
-20℃保存，有效期12个月。
声明 ：本官网所有报价均为常温或者蓝冰运输价格，如有产品需要干冰运输，需另外加收干冰运输费。