免疫组化DAB染色操作全流程演示
标本固定
固定的目的是：
①防止标本从玻片上脱落；
②除去防碍抗原—抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果；
③固定的标本易于保存。固定剂的选择一般用 4%多聚甲醛。
*相关产品：
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| abs9179-500ml | 4%多聚甲醛/通用型组织固定液 | 500ml |
脱水、石蜡包埋和制片
脱水用梯度乙醇（由低到高）充分脱水、对组织要完全浸蜡、切片时刀片要干净和锋利。否则容易裂片和脱片等。
脱蜡和水化
这是为了后面的抗体等试剂能够充分与组织中抗原等结合反应。脱蜡可以先60度20min，然后立即二甲苯1-3分别10min，但当天制好的切片可以60度3-4h。水化用梯度乙醇（由高到低）。若脱蜡和水化不全易出现局灶性反应和浸洗不全，而产生非特异性背景着色。
抗原修复
由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性；因此要进行抗原修复。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。常用的修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的、高pH的等）。
*相关产品：
| 货号 | 品名 | 规格 |
| abs9248-100ml | 柠檬酸钠抗原修复液(50×) | 100ml |
| abs9247-100ml | EDTA抗原修复液(50×) | 100ml |
| abs9207-100ml | 冰冻切片快速抗原修复液(5×) | 100ml |
| abs9208-100ml | 细胞爬片抗原修复液（1X） | 100ml |
| abs9208-500ml | 细胞爬片抗原修复液（1X） | 500ml |
| abs9336-100ml | 胃蛋白酶抗原修复液 | 100ml |
细胞通透
目的是使抗体能够充分地进入胞内进行结合反应。一般用Triton X-100、蛋白酶k等通透液。如TritonX-100可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。
*相关产品：
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| abs9149-100ml | Triton X-100 | 100ml |
| abs9149-500ml | Triton X-100 | 500ml |
灭活内源性过氧化物酶和生物素
在传统的ABC法和SP法中，免疫组化反应结果容易收到内源性过氧化物酶和生物素的干扰，必须用过氧化氢和卵白素等进行灭活。灭活内源性POD一般3%过氧化氢灭活时间短点，而0.3%过氧化氢则可以适当延长封闭时间。
*相关产品：
组化笔
| 货号 | 品名 | 规格 |
| abs929-1支 | 免疫组化笔 | 1支 |
内源性封闭
| 货号 | 品名 | 规格 |
| abs9333-100ml | 过氧化物酶封闭液(H2O2法) | 100ml |
| abs9334-100ml | 碱性磷酸酶封闭液(Levamisole法) | 100ml |
| abs9335-100ml | 内源性生物素封闭液 | 100ml |
血清封闭
组织切片上有剩余的位点可以与一抗非特异性结合，造成后续结果的假阳性；因此需要使用封闭剂进行封闭。常用试剂为血清和BSA等。封闭血清一般是和二抗同一来源的，但不能与一抗来源一致。
*相关产品：
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| abs933-50ml | Goat serum | 50ml |
| abs935-50ml | The ass/donkey serum | 50ml |
| abs937-100ml | Normal mouse serum | 100ml |
| abs946-50ml | Rabbit serum | 50ml |
| abs947-100ml | Rat serum | 100ml |
一抗和二抗浓度和孵育时间
一抗孵育条件在免疫组化反应中最重要，包括孵育时间和抗体浓度。一抗孵育温度有几种：4度、室温、37度，其中4度效果最佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37度1-2h，4度过夜（从冰箱拿出后37度复温45min）。具体条件还要摸索。二抗一般室温或37度30min-1h，具体时间需要摸索，而浓度一般有工作液，若是浓缩液还要摸索浓度。
*相关产品：
| 货号 | 品名 | 规格 |
| abs20001-100ul | Goat anti-mouse IgG-HRP | 100ul |
| abs20002-100ul | goat anti-rabbit IgG-HRP | 100ul |
| abs20003-100ul | Goat anti-Mouse IgG-FITC | 100ul |
| abs20004-100ul | Goat anti-Rabbit IgG-FITC | 100ul |
抗体稀释
其实许多实验室抗体稀释液就用一般PBS即可，另外还可以加叠氮化钠防腐剂、BSA稳定剂等组份，对抗体的多次回收利用较好。
*相关产品：
| 货号 | 品名 | 规格 |
| abs9299-100ml | 一抗二抗稀释液 | 100ml |
切片清洗（浸洗、冲洗和漂洗）
为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色，所以适当地加强清洗（延长时间和增多次数）尤为重要。需注意：
（1）单独冲洗，防止交叉反应造成污染。
（2）温柔冲洗，防止切片的脱落。
（3）冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质。
（4）PBS的PH和离子强度的使用和要求（建议 PH 7.4- 7.6，浓度是 0.01M；中性及弱碱性条件有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解）。
*相关产品：
| 货号 | 品名 | 规格 |
| abs9256-500ml | 10*TBS | 500ml |
| abs952-100ml | 10*TBST | 100ml |
| abs961-500ml | 10*PBS缓冲液 | 500ml |
DAB显色
背景的深浅和特异性染色的深浅均可以由DAB孵育条件决定。DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现特异性染色较强而本底着色较浅时即可冲洗。
*相关产品：
| 货号 | 品名 | 规格 |
| abs9210-1kit | DAB 显色试剂盒(棕黄色,IHC) | 1kit |
| abs9213-1kit | DAB 显色试剂盒(紫蓝色,WB) | 1kit |
| abs9212-1kit | DAB 显色试剂盒(棕黄色，WB) | 1kit |
| abs9211-1kit | DAB 显色试剂盒(蓝紫色，IHC) | 1kit |
复染
目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位，经常用苏木素复染（胞核染料）。
*相关产品：
| 货号 | 品名 | 规格 |
| abs47047616-10ml | DAPI染色液 | 10ml |
| abs47047616-50ml | DAPI染色液 | 50ml |
| abs47047618-100ml | 姬姆萨染液 | 100ml |
| abs47047618-500ml | 姬姆萨染液 | 500ml |
| abs9140-100ml | 甲基绿染液 | 100ml |
| abs9142-5g | 核固红染液 | 5g |
| abs9214-100ml | 改良型Mayer's苏木素染液 | 100ml |
| abs9214-500ml | 改良型Mayer's苏木素染液 | 500ml |
封片
为了长期保存，一般用中性树胶封片，避免产生气泡，方法是直接在载玻片组织上滴一滴封片液，然后一手拿住盖片某一拐角，而另一手拿对面的那个拐角，接近封片液近端的拐角先降低，直至接触到液体时为止；当发现液体接触面在不断弥散时，则可以缓慢降低另一拐角，这样一般不会产生气泡。
*相关产品：
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| abs9177-100ml | 中性树胶（镜检用永久封片剂） | 100ml |
| abs9234-5ml | 抗荧光淬灭封片液 | 5ml |
| abs9235-5ml | 抗荧光淬灭封片液（含DAPI） | 5ml |
| abs9236-1ml | 抗荧光淬灭封片液（含PI） | 1ml |
| abs9240-5ml | 抗荧光淬灭封片剂（水溶性） | 5ml |
即用型试剂盒
*相关产品：
| 货号 | 品名 | 规格 |
| abs957-5ml | 即用型高效免疫组化二抗试剂盒 | 5ml |
| abs997-5ml | 即用型免疫组化二抗试剂盒（抗小鼠） | 5ml |
| abs998-5ml | 即用型免疫组化二抗试剂盒（抗兔） | 5ml |
| abs50012-20T | 四色多重荧光免疫组化染色试剂盒（鼠兔二抗） | 20T |
| abs50012-100T | 四色多重荧光免疫组化染色试剂盒（鼠兔二抗） | 100T |
| abs50028-20T | 四色多重荧光免疫组化染色试剂盒（兔二抗） | 20T |
| abs50028-100T | 四色多重荧光免疫组化染色试剂盒（兔二抗） | 100T |
| abs50013-20T | 五色多重荧光免疫组化染色试剂盒（鼠兔二抗） | 20T |
| abs50013-100T | 五色多重荧光免疫组化染色试剂盒（鼠兔二抗） | 100T |
| abs50029-20T | 五色多重荧光免疫组化染色试剂盒（兔二抗） | 20T |
| abs50029-100T | 五色多重荧光免疫组化染色试剂盒（兔二抗） | 100T |
| abs50014-20T | 六色多重荧光免疫组化染色试剂盒（鼠兔二抗） | 20T |
| abs50014-100T | 六色多重荧光免疫组化染色试剂盒（鼠兔二抗） | 100T |
| abs50030-20T | 六色多重荧光免疫组化染色试剂盒（兔二抗） | 20T |
| abs50030-100T | 六色多重荧光免疫组化染色试剂盒（兔二抗） | 100T |
| abs50015-20T | 七色多重荧光免疫组化染色试剂盒（鼠兔二抗） | 20T |
| abs50015-100T | 七色多重荧光免疫组化染色试剂盒（鼠兔二抗） | 100T |
| abs50031-20T | 七色多重荧光免疫组化染色试剂盒（兔二抗） | 20T |
| abs50031-100T | 七色多重荧光免疫组化染色试剂盒（兔二抗） | 100T |
