粘膜相关不变T细胞（MAIT）介绍
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在细菌和病毒感染，粘膜相关不变T（MAIT）细胞可以通过MHC类相关激活分子（MR1）依赖方式（TCR）识别MR1通过T细胞受体呈现细菌配体（a），和/或MR1独立方式IL-12等，由感染细胞和MAIT细胞通过细胞因子受体（b）。
MAIT细胞的激活诱导它们释放颗粒酶B和穿孔素（杀死感染细胞），它们的增殖和产生细胞因子（肿瘤坏死因子（TNF），干扰素-γ（IFNγ）和IL-17A），抑制病毒复制和细菌生长。活化的MAIT细胞也能促进单核细胞的募集和活化。
MAIT cells在感染疾病中的变化和功能
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1、本文实验目的
HIV-1 感染者的粘膜相关不变 T (MAIT) 细胞因机制不明而功能受损。单细胞转录和表面蛋白分析显示，与健康个体相比，HIV-1 感染者的外周 MAIT 细胞因干扰素 (IFN) 刺激基因上调而高度活化。
持续 IFN-α 治疗通过触发单核细胞产生高水平白细胞介素-10 (IL-10) 来抑制 MAIT 细胞对大肠杆菌的反应，随后抑制 IL-12 的分泌，IL-12 是 MAIT 细胞活化的关键共刺激细胞因子。
阻断 IFN-α 或 IL-10 受体可预防体外 HIV-1 暴露引起的 MAIT 细胞功能障碍。
研究结果表明 IFN-I/IL-10 轴在 HIV-1 感染期间的 MAIT 细胞功能障碍中起着核心作用，这对于开发针对 HIV-1 感染患者细菌共感染的抗 IFN-I/IL-10 策略具有重要意义。
2、实验信息总结
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3、实验内容
①胞内ICS流式检测MAIT cell function功能
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PBMCs与PFA固定的大肠杆菌[[10 multiplicity of infection (MOI)]孵育24小时或者 live H37Ra (10 MOI) for 48小时，选择性加入Anti cd28单克隆抗体（1.25mg/ml）。
对于细胞因子刺激，加入1L-12和IL-18细胞因子组合（100 ng/ml），刺激时间24小时。
在大肠杆菌和IL-12/18刺激培养开始时Anti_x0002_CD107a phycoerythrin (PE)/Cy7抗体。在最后6小时的刺激环节加入Brefeldin A进行细胞因子阻断处理。
结论：MAIT cells from HIV-1–infected细胞对E.coli免疫应答受损，但对IL-12/18刺激反应正常.
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MAIT细胞的杀伤功能评估通过IFN，GzmB，和脱颗粒标记CD107a来做评价（分别给与E.coli&IL-12/18刺激处理）。
与HC组相比，来自hiv-1感染受试者的MAIT细胞在大肠杆菌刺激下产生的IFN，GzmB和CD107a水平要低得多。
有效的ART治疗并没有完全恢复MAIT细胞的功能，这表明与VIRT组相比，ART组MAIT细胞产生的GzmB和CD107a低水平不变。
HC和VIR受试者之间的MAIT细胞对IL-12/18刺激的反应幅度没有显著差异。出乎意料的是，ART增加了IL-12/18刺激下MAIT细胞的IFN-g和GzmB的分泌。
②在HIV-1感染过程中，MAIT细胞上抑制性受体表达上调和IFN刺激基因激活状态
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为了明确在HIV-1感染期间MAIT细胞的表型和分子特征。通过流式方法实现检测多个细胞表面marker，会有较高的检测难度。而通过带有oligo寡核苷酸的抗体能够在单细胞测序实验中同时细胞表面marker和全转录组检测，所以本文在BD Rhapsody平台上使用寡聚偶联抗体（Abseq）结合单细胞mRNA测序（scRNAseq）比较了29个表面蛋白的表达水平和259个mRNA检测。有助于加深对蛋白质生物学的理解，并加速单细胞研究。
29个cell surface marker LIST：
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A：UMAP图，显示来自2名健康供体（HC）和4名艾滋病毒-1感染者（VIR）的23424个T细胞的分布，总共鉴定了18个集群。
B：主要T细胞亚群在不同来源样本中的百分比占比。
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C-F：UMAP图突出了选定表面蛋白的表达。
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D图：火山图显示了来自VIR和HC受试者的MAIT细胞之间差异表达的基因和表面蛋白
E图：使用DAVID对来自VIR和HC受试者的MAIT细胞中上调的基因进行GO分析
在来自HIV+和HC个体的MAIT细胞中上调的蛋白和基因中有激活标记物，如CD38、CD134和HLA-DRA；衰竭相关基因，包括LAG3和TIGIT；以及IFN刺激基因（ISGs），包括CXCR3、STAT1和CCL5。
与T细胞功能相关的蛋白和基因，包括CD7、CD98的蛋白和基因CD54、CD541、DUSP1、KLRB1和MAIT患者的MAIT细胞中表达下调。
富集分析进一步显示，来自VIR受试者的MAIT细胞中上调的基因在细胞激活途径中富集。因此，来自hiv-1感染患者的MAIT细胞显示出一种具有免疫激活特征的基因特征，与抑制性受体的上调和增加相关。
③ 持续验证IFN-I信号通路与HIV-1感染期间的MAIT细胞功能障碍是否相关
验证一：流式检测
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验证二：体外培养药物干预
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从健康供体中新鲜分离的PBMCs未经处理或在100 ng/ml下用IFN处理24、48或72小时，然后评估MAIT细胞表面CD69、CD38或HLA-DR的表达。
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总结说明：
感染 HIV-1 的个体会出现MAIT细胞丢失，尽管这些细胞似乎并未被 HIV-1感染。在 HIV-1 感染过程中，MAIT细胞是死亡还是从外周血迁移到肠粘膜部位仍存在争议。HIV-1感染者体内残留的循环 MAIT细胞在应对大肠杆菌时会出现功能障碍，有效的抗逆转录病毒疗法 (ART) 治疗无法完全恢复MAIT细胞的数量和功能。
MAIT 细胞的持续缺陷增加了对于了解MAIT细胞功能障碍机制的必要性。
HIV-1 感染会诱导 I 型干扰素 (IFN-I) 的持续产生，未经治疗的急性和慢性感染患者外周浆细胞样树突状细胞 (pDC) 中的 IFN-αmRNA和血清中的IFN-α蛋白水平均显著增加。越来越多的证据表明，IFN-I 通过影响多个免疫细胞区室，包括 T 细胞 、先天淋巴细胞 和造血干细胞 ，与慢性 HIV-1 感染期间的免疫功能障碍和疾病进展有关。
此外，即使在接受抑制性 ART 治疗的情况下，一些患者中 IFN-I 诱导的异常激活仍持续存在。研究表明，IFN-I通过促进 IFN-γ和GzmB的产生来增强 MAIT 细胞对TCR刺激的效应反应，表明 IFN-I 在调节MAIT细胞方面发挥着复杂的作用。
Reference:
1.Mucosal-associated invariant T cells and disease.
2.Sustained IFN-I stimulation impairs MAIT cell responses to bacteria by inducing IL-10 during chronic HIV-1 infection.
3.Sustained IFN-I stimulation impairs MAIT cell responses to bacteria by inducing IL-10
during chronic HIV-1 infection.
