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【流式秘籍87】调补偿,你选择用细胞,还是用微球?

1、补偿来源

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· 流式细胞术中,多色检测时不同荧光素激发后会发射出一定波段的荧光信号,部分信号会溢漏到其他通道,需要通过补偿调节消除溢漏影响。
· 荧光补偿是校正其他通道溢漏过来的荧光信号,获取目标通道的真实信号,以进行准确的流式数据分析。


不调补偿,细胞分群位置不对

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单阳管补偿调的不对,Full Panel分群结果一团糟

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2、调补偿的原则

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如果细胞量太少;如果抗原丰度很低;
如果样本间差异比较大;
遇到这些问题,该怎么办呢

方案1、样本自身调节补偿

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方案2.  CD3/CD4高表达指标调节补偿

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注意:选择相同荧光染料但偶联其它抗体的试剂。此方法可以应对阳性信号弱的情况。
比如PD-1检测,如果方案中使用的是APC标记的PD-1试剂,调节补偿时可选择相同荧光染料但偶联其它抗体的试剂(如CD4-APC)来代替。


方案3、补偿微球做单阳管

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补偿微球VS细胞样本效果


补偿珠是一种很好的工具,如果标记物在细胞上表达不佳或没有足够的细胞用于样本和对照,它会非常有用,但补偿珠并不是单染细胞的完美替代品:
· Bead和细胞的自发荧光信号、抗原表达丰度并不一致
· 荧光素在Bead上和在细胞上,荧光团的发射光谱有时会不同
· 由于荧光团特征的这种不匹配,意味着在珠子上运行良好的补偿基质可能在细胞上效果不佳

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推荐处理方式

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补偿微球产品推荐

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