文章背景：Reference:Heubeck A, Savage A, Henderson K, Roll C, Hernandez V, Torgerson T, Bumol T, Reading J. Cross-platform immunophenotyping of human peripheral blood mononuclear cells with four high-dimensional flow cytometry panels. Cytometry A. 2023 Jun;103(6):500-517. doi: 10.1002/cyto.a.24715. Epub 2023 Jan 13. PMID: 36571245.
一、实验背景
本文通过使用BD Symphony A5传统流式平台和Cytek Aurora 光谱流式平台交联检测了4个25色+的人外周血PBMC高维深度免疫分型方案，涵盖64种生物学Marker，主要包括T/B/NK/髓系的免疫亚群及功能激活指标，并在方案设计之初加入了共同连接指标，以保证跨方案间的一致性以及质控的可靠性。值得一提的是，这两台流式仪均在高质量数据输出方面表现出优异的性能，作者认为本文为不同仪器上多参数流式实验设计的跨度与深度提供了可参考的准则及比较数据。
二、不同方案间的QC验证
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手动圈门策略展示了4个25色+方案中的7个共同指标: CD45, CD3, CD19, CD14, CD56, HLA-DR, and viability，以及9个人外周PBMC供体的T/B/NK髓系总群的比例统计，结果显示不同种细胞主群在不同受试者的比例中CV值不超过10%，为后续精细亚群分型方案提供了可靠的基础。
三、PBMC中33种细胞亚群检测
此25色Panel提供了上图中所提到的T/B/NK完整分型的全貌，并由Flowjo 10.8.1软件进行了UMAP降维分析展示，包括T/B/NK/粒细胞/HSC/单核/DC等33种细胞亚类。
四、T细胞深度免疫分型检测
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26色T细胞精细亚群panel检测了包括CD4 αβ T细胞在内的主要T细胞亚群：CD4 + TCRαβ+、CD8 αβ T细胞CD8 + TCRαβ+、双阳性αβ T细胞C(D4 + CD8 + TCRαβ+)、双阴性αβ T细胞(CD4-CD8- TCRαβ+) 、γδ T细胞(CD3High + TCRαβ-)、调节性T细胞(CD25 + CD127-)、滤泡辅助性T细胞(Tfh) (CXCR5 + PD-1+)、组织驻留T细胞 (Trm) (CD103+)、CD56高表达NK细胞(CD3-CD56high+)和CD56低表达NK细胞(CD3-CD56low+)、幼稚T细胞(CD45RA + CD197+)、中央记忆性T细胞(CD45RA-CD197+)、效应记忆T细胞(CD45RA-CD197-)和 终末效应记忆T细胞 (TEMRA) (CD45R + CD197-)。
五、B细胞深度免疫分型
25色B细胞精细亚群panel主要检测了包括中间型B细胞(CD24++CD38++CD27-IgD + CD10+)、幼稚B细胞(CD38lowCD24lowCD27-IgD + CD10-)、class-switched记忆B细胞(CD24+ CD38 - IgD + CD10-) + CD27 + IgA+/-IgG+/-)、unswitched记忆B细胞(CD24 + CD38 + CD27 + IgD + IgM+/-)、表面Ig阴性的记忆B细胞 (CD24 + CD38 + CD27 + IgD-IgM-IgA-IgG-)，效应B细胞(CD19 + CD24-CD38- cd21 /lo)，双阴性B细胞(CD27- IgD-)，以及浆母细胞(CD20-CD24-CD27 + CD38 + CD319+)。
六、髓系细胞深度免疫分型
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26色髓系细胞精细亚群panel主要检测了经典型单核细胞(CD14+ CD16-)、中间型单核细胞(CD14+ CD16+)、非经典型单核细胞(CD14-CD16+)、cDC1 (CD141 + CD1c-)、cDC2 (CD141-CD1c+)、DN-DC (CD141-CD1c)、浆细胞样DC (pDC) (CD123+ CD304+)、中性粒细胞 (CD15 + CD16+)和嗜碱性粒细胞(CD123 + CD11b + HLA-DR-)。
七、常规流式与光谱流式展示同方案结果
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上图展示了不同细胞群体的比例再BD Symphony A5和Cytek Aurora上的相关性，可见稀有亚群的R值较小，而主群的一致性很高，
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上图对于稀有亚群的伪彩散点图进行了结果展示，比例上的略有差异未影响正常的细胞散点图形态分布，高配置常规流式和光谱流式均可作为高维多色流式方案设计的首选。
