一 NK细胞的获得
△点击放大图片
外周血来源的NK
△点击放大图片
① 调整人全血中分选（130-127-695）的NK细胞密度为1*106 cells/mL，重悬至含有5%血清（SV30208.02）的X-VIVO 15培养基中（04-418Q）；
② 加入200 U/mL IL-2（UA040057-50μg），10 ng/mL IL-15（UA040010-50μg）和1*106 cells/mL的K562细胞（丝裂霉素处理灭活）。在15天的扩增过程中，每隔2-3天对NK细胞进行一次传代，补充细胞因子和新鲜制备的K562细胞
NK细胞系 NK92
△点击放大图片
①调整NK细胞密度为2.5×105/mL
②重悬至完全培养基（RPMI 1640（SH30809.01）+5%FBS（SH30406.05）+2 mM L-glutamine（abs9354-100mL）+10 U/mL双抗（SV30010）+20 U/ml IL-2（UA040057-50μg））
③每2-3天更换新鲜的完全培养基。
脐带血来源的NK
△点击放大图片
①分选CD34+细胞：从脐带血中使用CD34阳性选择磁珠（130-046-702）分离表达CD34的造血干细胞/祖细胞；
②将分选出的CD34+细胞以造血干细胞分化培养基（DMEM/F12（SH30271.01）+ 20%热灭活人AB型血清+ 5 ng/mL亚硒酸钠、50 µM乙醇胺、20 mg/mL抗坏血酸+ 2 mM L-谷氨酰胺（abs9354-100mL）、1%双抗（SV30010）、25 µM β-巯基乙醇（abs9592-100mL））重悬，接种在经过照射处理的OP9-DLL4细胞上，并保持添加下列细胞因子，5 ng/mL IL-3（仅第一周添加），20 ng/mL SCF（UA040115-1mg），10 ng/mL IL-15（UA040010-1mg），10 ng/mL FLT3L（UA040011-1mg），20 ng/mL IL-7（UA040118-1mg）；
③每周更换一次培养基以提供持续的营养和生长因子支持，28至35天左右可通过流式细胞术检测细胞表面标志物的变化，当细胞发展成为CD45+CD56+CD33−CD3−表型时，说明已经发育成为NK细胞
hPSC干细胞分化来源的NK
△点击放大图片
①造血祖细胞分化
1) 使用OP9骨髓基质细胞作为支持细胞，与H1细胞（α-MEM+20%FBS）共同培养来诱导造血祖细胞分化；
2) 共同培养大约12天后，在培养物中可以观察到许多分化的菌落，并且能够检测到小部分CD34+细胞的存在。
②诱导NK细胞分化
1) 收获经过“造血祖细胞分化”阶段后获得的细胞，并将其与表达Notch配体Delta-like-1（DLL1）的OP9细胞变体（OP9-DLL1细胞）共培养；
2) 在含有20% FBS（abs972-500mL）、10 ng/mL SCF（abs05620-50ug）、5 ng/mL FLT3L（abs05148-50ug）、5 ng/mL IL-7（abs04991-100ug）、10 ng/mL IL-15（abs00818-50ug）的α-MEM（abs9506-500mL）培养基中，每周进行一次这样的共培养。
3) 第一周期共培养结束后（第19天），大部分细胞仍然保持贴壁生长状态。
4) 第二周期（第26天），开始出现一些明亮、圆形、半悬浮的细胞。
5) 第三周期（第33天），这些细胞逐渐脱离并聚集在培养孔中心。
6) 第四周期（第40天），更多的悬浮细胞显现出来，形态上表现为小型、圆形、明亮的淋巴细胞；可通过流式细胞术鉴定，细胞表型为CD45+CD56+CD3−TCRαβ−CD4−CD8−，即NK细胞。
NK区别#四种不同来源
△点击放大图片
二 NK细胞快速鉴定骨架panel
1、指标选择
△点击放大图片
2、快速上手panel
△点击放大图片
· Mouse NK细胞鉴定panel
△点击放大图片
· Human NK细胞鉴定panel
△点击放大图片
更多NK细胞工具
