一、实验思路框架
| 样本来源类型 | 检测指标 | 流式仪器型号 | 靶标细胞亚群 |
| 小鼠肺组织(健康/转移) | 27色 | Cytek Aurora 5-Laser | 中性粒细胞、炎症性单核细胞、常驻单核细胞、嗜酸性粒 细胞、cDC1/cDC2、pDC、肺泡巨噬细胞(AMZ)、间质 巨噬细胞(IMØ)、B细胞、辅助T细胞、调节性T细胞、 细胞毒性T细胞、NK细胞、ILC1-3 |
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二、配色方案
| 指标（靶标） | 克隆号 | 荧光素 | 抗体用量 | 激光通道 |
| CD62L | MEL-14 | BUV395 | 50 ng/test | 355 nm (UV) |
| CD103 | M290 | BUV563 | 100 ng/test | 355 nm (UV) |
| CD11c | N418 | BUV661 | 50 ng/test | 355 nm (UV) |
| CD335 (NKp46) | 29A1.4 | BUV737 | 100 ng/test | 355 nm (UV) |
| CD44 | IM7 | BUV805 | 33 ng/test | 355 nm (UV) |
| F4/80 | BM8 | BV421 | 200 ng/test | 405 nm (V) |
| CD4 | GK1.5 | Pacific Blue | 83 ng/test | 405 nm (V) |
| CD8 | QA17A07 | Spark Violet 538 | 250 ng/test | 405 nm (V) |
| CD127 (IL-7Rα) | A7R34 | BV605 | 200 ng/test | 405 nm (V) |
| CD206 (MMR) | C068C2 | BV650 | 100 ng/test | 405 nm (V) |
| CD274 (PD-L1) | MH5 | BV711 | 14 ng/test | 405 nm (V) |
| Ly6C | HK1.4 | BV785 | 25 ng/test | 405 nm (V) |
| CD64 | X54-5/7.1 | FITC | 500 ng/test | 488 nm (B) |
| CD45 | 30-F11 | Spark Blue 550 | 100 ng/test | 488 nm (B) |
| CD19 | 1D3 | BB700 | 25 ng/test | 488 nm (B) |
| CTLA-4 (CD152) | UC10-4B9 | PE | 100 ng/test | 561 nm (YG) |
| CD24 | M1/69 | PE-Dazzle 594 | 50 ng/test | 561 nm (YG) |
| CD25 | PC61 | PE-Cy5 | 100 ng/test | 561 nm (YG) |
| CX3CR1 | SA011F11 | PE-Fire 700 | 25 ng/test | 561 nm (YG) |
| KLRG-1 | 2F1/KLRG1 | PE-Cy7 | 50 ng/test | 561 nm (YG) |
| CD11b | M1/70 | PE-Fire 810 | 33 ng/test | 561 nm (YG) |
| CD122 (IL-2Rβ) | TM-β1 | APC | 100 ng/test | 640 nm (R) |
| PD-1 (CD279) | 29F.1A12 | AF647 | 250 ng/test | 640 nm (R) |
| MHC II (I-A/I-E) | M5/114.15.2 | AF700 | 63 ng/test | 640 nm (R) |
| Ly6G | 1A8 | APC-Cy7 | 20 ng/test | 640 nm (R) |
| CD3 | 17A2 | APC-Fire 810 | 100 ng/test | 640 nm (R) |
| Viability Dye | - | Zombie UV | 1:400稀释 | 355 nm (UV) |
三、圈门逻辑
1、主群&背景信号：
排除碎片（FSC-A vs SSC-A）→ 单细胞（FSC-H vs FSC-A）→ 活细胞（Zombie UV-）→ CD45+ 白细胞
2、髓系细胞亚群：
中性粒细胞：Ly6G+CD11b+
单核细胞：CD11b+Ly6C+（炎症性）或 CD11c+（常驻）
巨噬细胞：CD64+ → 分 AMØ（CD11c+CD206+）和 IMØ（CD11b+CX3CR1+）
树突细胞：CD24+MHC II+ → cDC1（CD103+CD11b-）、cDC2（CD11b+CD103-）、pDC（CD24-Ly6C+）
3、淋巴系细胞亚群：
T细胞：CD3+ → CD4+（辅助T）、CD8+（细胞毒性T）、CD25+CD127low（调节性T）
B细胞：CD19+CD3-
NK/ILC：CD335+（NK）、CD127+（ILC1-3）
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四、流式结果图
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参考文章
Optimized full-spectrum flow cytometry panel for deep immunophenotyping of murine lungs
