一、实验思路框架
| 样本来源类型 | 小鼠胰腺、肝脏、肺 |
| 检测指标 | 40色 |
| 流式仪器型号 | Sony ID7000（5激光配置） |
| 靶标细胞亚群 | - CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、双阴性T细胞（DN T）、γδ T细胞、NKT细胞 - B细胞（CD19+）、NK细胞（NKp46+） - 中性粒细胞（Ly6G+）、嗜碱性粒细胞（FcεR1α+）、嗜酸性粒细胞（Siglec-F+） - 巨噬细胞（F4/80+）、树突状细胞（CD11c+ MHC-II+） |
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二、配色方案
| 标记物 (Marker) | 荧光素 (Fluorochrome) | 克隆号 (Clone) |
| CD45 | BUV395 | 30-F11 |
| CD357 (GITR) | BUV496 | DTA-1 |
| CD62L | BUV563 | MEL-14 |
| CD170 (Siglec F) | BUV615 | 1RNM44N |
| F4/80 | BUV661 | T45-2342 |
| CD49d | BUV737 | R1-2 |
| CD3 | BUV805 | 17A2/145-2C11 |
| IgD | BV421 | 11-26c.2a |
| CD11b | VioBlue | REA592 |
| γδ TCR | BV480 | GL3 |
| IgM | BV510 | RMM-1/R6-60.2 |
| CD8a | Spark Violet 538 | QA17A07 |
| Ly-6C | BV570 | HK1.4 |
| XCR1 | BV605 | ZET |
| CD69 | BV650 | H1.2F3 |
| KLRG1 | BV711 | MAFA |
| CD5 | BV750 | 53-7.3 |
| CD11c | BV785 | N418 |
| I-Ad | AF488 | 1939/10/8 |
| TCR β链 | AF532 | H57-597 |
| B220 | Spark Blue 574 | RA3-6B2 |
| FcεR1α | BB630 | 1-Mar |
| CD19 | BB700 | 1D3 |
| CD25 | PerCP-eFluor710 | PC61.5 |
| CD9 | RB780 | KMC8 |
| PD-1 | PerCP-Fire806 | 29F.1A12 |
| CXCR5 | PE | L138D7 |
| CD44 | Spark YG 593 | IM7 |
| CD103 | PE-CF594 | M290 |
| CCR7 | PE-Cy5 | 4B12 |
| CD206 | PE-Fire700 | C068C2 |
| Tim-4 | PE-Cy7 | RMT4-54 |
| Ly-6G | PE-Fire810 | 1A8 |
| FoxP3 | APC | FJK-16s |
| NKp46 | eFluor 660 | 29A1.4 |
| CD4 | APC-Cy5.5 | GK1.5 |
| c-kit | R718 | ACK2 |
| ICOS | APC-eFluor780 | C398.4A |
| CD163 | APC-Fire810 | S15049l |
三、圈门逻辑
1、核心圈门策略：
排除碎片和双联体：
前向散射（FSC-A vs. FSC-H）排除双联体。
FSC-A vs. SSC-A排除碎片（低FSC信号）。
2、活细胞筛选：
通过LIVE/DEAD Fixable Blue（UV激发）阴性选择活细胞。
白细胞富集：
CD45+门选所有白细胞。
3、主要免疫亚群分群：
T细胞：CD3+ → 细分CD4+、CD8+、γδ TCR+、NKT（CD3+ NKp46+）。
B细胞：CD19+或B220+。
髓系细胞：CD11b+ → 细分巨噬细胞（F4/80+）、中性粒细胞（Ly6G+）、树突状细胞（CD11c+ MHC-II+）。
NK细胞：CD3- NKp46+。
4、功能亚群分析：
T细胞激活/耗竭：CD44+（激活）、PD-1+（耗竭）。
巨噬细胞极化：CD206+（M2型）、TIM-4+（组织驻留）。
四、流式结果图
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参考文章
Protocol for murine multi-tissue deep immunophenotyping using a 40-color full-spectrum flow cytometry panel
