Mouse小鼠固有淋巴细胞的高维免疫表型分析

一、实验思路框架

二、配色方案

三、圈门逻辑

1、排除碎片、双联体、死细胞、红细胞：

使用SSC-A vs SSC-B（405nm vs 488nm）去除红细胞污染；

使用LIVE/DEAD™ Blue排除死细胞；

选择CD45⁺活细胞。

2、总ILC圈门：

从CD45⁺细胞中选出IL-7Rα⁺且Lineage⁻（CD3, CD4, CD5, CD11b, CD11c, CD19, B220, F4/80, FccR1, Gr1, TCRβ, TCRγδ, Ter119）的细胞

3、ILCP圈门：

在ILC中选出PLZF⁺IL-18Rα⁺的细胞。

4、成熟ILC亚群圈门：

ILC1：T-bet⁺ RORγt⁻ ST2⁻ CD49b⁻ IL-18Rα⁺ NKp46⁺ CD49a⁺/TRAIL⁺/⁻

ILC2：GATA-3⁺ T-bet⁻ RORγt⁻ KLRG1⁺/⁻ ST2⁺/⁻

ILC3：

         NCR⁺ILC3：RORγt⁺ T-bet⁺/⁻ NKp46⁺ CCR6⁻

        NCR⁻ILC3：RORγt⁺ T-bet⁺/⁻ NKp46⁻ CCR6⁻

        CCR6⁺ LTI-like ILC3：RORγt⁺ T-bet⁻ NKp46⁻ CCR6⁺（部分CD4⁺）

5、NK细胞圈门：

从Lineage⁺中选出CD11b⁺ NKp46⁺ T-bet⁺的细胞，进一步分为：

trNK：CD49a⁺ CD49b⁻

cNK：CD49a⁻ CD49b⁺

6、功能分析：

使用PMA/Ionomycin/BFA + 细胞因子刺激（IL-12/IL-18、IL-33、IL-1β/IL-23）后，检测IFN-γ、IL-5、IL-13、IL-17A、IL-22和Ki-67表达。

四、流式结果图

△点击放大图片

参考文章

Full Spectrum Flow Cytometry for High-Dimensional Immunophenotyping of Mouse Innate Lymphoid Cells