RAW264.7是小鼠单核巨噬细胞白血病细胞，是免疫学、炎症模型、肿瘤微环境等热门研究中最常用的经典模式细胞。该细胞兼具单核细胞与巨噬细胞特性，增殖速度快、易活化、表型敏感。但相较于常规肿瘤细胞，RAW264.7培养容错率较低，状态极易受环境、操作、血清质量影响，也是实验室公认极易出问题的高难度细胞，本文将针对RAW264.7的细胞培养流程进行梳理和指导。
一、细胞复苏
1、【准备工作】：水浴锅提前预热至37℃；准备9ml培养基在37℃条件下预热；生物安全柜提前使用紫外照射30min
2、【融化】 ：从液氮取出冻存管，37℃水浴快速摇晃融化，约1-2min
3、【重悬】 ：使用75%酒精擦拭冻存管外壁，生物安全柜内开盖，将细胞悬液缓慢滴入含9ml预热完全培养基的15mL离心管中
4、【离心】：600rpm离心5min，弃上清
5、【重悬】：加入1ml完全培养基轻轻吹打10次细胞悬液。准备一个新的10cm培养皿，在皿盖上标注细胞名称、传代人、代数、日期。加入9ml完全培养基，再加入1ml细胞悬液。画十字混匀，使细胞在皿中均匀分布
6、【培养】：放入培养箱中培养
二、细胞传代
1、【实验准备】：配制完全培养基：DMEM（abs9483-500mL）+10%FBS（abs972-500ml）+1%P/S（abs9244-100ml）。提前取出PBS（abs962-500ml）、完全培养基，恢复至室温；生物安全柜提前使用紫外照射30min。
注意：该细胞传代过程中所有试剂均需要恢复至室温，防止低温刺激细胞分化。
2.【镜检】：在显微镜下观察细胞，细胞密度约80%、且细胞形态圆润无分化状态，即可进行传代；
3.【细胞清洗】：吸弃旧培养基，沿着培养皿壁缓慢加入2ml PBS，轻轻摇晃培养皿让PBS均匀覆盖，吸弃PBS；
注意：如果镜检下漂浮死细胞较多，可以再用PBS清洗一遍。
4.【细胞收集】：加入3ml完全培养基，轻柔吹打皿底的细胞，使细胞从皿底脱落；将细胞悬液收集至15ml离心管中；
注意：此步骤吹打需轻柔，如果有少部分吹不下来的细胞可以直接丢弃。该细胞不用胰酶消化，胰酶会刺激细胞分化。
5.【离心】：600rpm离心5min后，用枪头吸弃上清；加入6ml完全培养基，轻轻吹打10-15次重悬细胞；
注意：该细胞传代比例为1:6-1:8，可根据传代比例加入适量完全培养基。
6.【传代】：准备一个新的10cm培养皿，在皿盖上标注细胞名称、传代人、代数、日期。加入9ml完全培养基，再加入1ml细胞悬液。画十字混匀，使细胞在皿中均匀分布；
7.【镜检】：在显微镜下观察细胞状态及细胞是否均匀分布，放入37℃，5%CO2培养箱中培养，每隔24H观察细胞状态；
注意：该细胞一般48h进行传代，超过3天不传代细胞容易分化。该细胞在培养时建议使用爱必信优级胎牛血清，劣质FBS也会导致细胞分化。
三、细胞冻存
1、【准备工作】：细胞冻存液可使用无血清细胞冻存液（abs9417-100mL），也可以自行配制：90%FBS（abs972-500mL）+10%DMSO（abs9187-100mL）。存管提前标注：细胞名称、代数、冻存人、冻存日期。生物安全柜提前使用紫外照射30min；
注意：单个皿可冻存3-4只。
2、【细胞收集】：细胞密度长到80%左右，按照传代步骤进行细胞收集，600rpm离心之后弃上清；
3、【细胞重悬】：加入4ml细胞冻存液，轻轻吹打重悬细胞；
4、【冻存】：每管加入1ml混合液至冻存管中，将冻存管放入冻存盒中，放入-80℃冰箱，过夜后转移至液氮罐中。
四、注意事项
1、严格控制细胞分化
（1）传代间隔不超过3天，密度＞90%细胞极其容易分化；
（2）密度不低于80%不传代，低密度贴壁牢、难吹打、易分化；
（3）全程无酶，胰酶会导致快速分化；
（4）代数≤15代，高代数分化率显著上升；
（5）使用优级血清，劣质血清会导致细胞分化。
2、操作轻柔
（1）该细胞操作时左右动作均需要轻柔，暴力吹打会导致细胞损伤和分化；
（2）离心转速降至600-800rpm，高离心转速会导致细胞损伤。
3、形态判断
（1）正常形态：圆形、透亮、聚集生长，漂浮细胞≤10%；（2）异常形态：梭形/多角形（分化）、大量漂浮、碎片多、浑浊（污染）。
五、absin胎牛血清产品优势
1.优宁维旗下血清品牌；
2.文献支持近200篇，最高IF=32.4；
3.院士课题组稳定使用；
4.近20种细胞验证数据，性能对标进口大牌；
5.内毒素低 ＜3 EU/mL，血红蛋白低 ＜50 mg/L；
6.单批次产能充足，批间差异小；
7.专业技术支持，细胞培养专业SOP指导；
8.50mL小包装分装服务；
9.血清类型丰富，高效助力实验；
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 血源 |
| abs981-500mL | 胎牛血清（特级） | 500mL | 中国内蒙古 |
| abs972-500mL | 胎牛血清（优级） | 500mL | 中国内蒙古 |
| abs974-500mL | 胎牛血清（标准级） | 500mL | 中国内蒙古 |
△点击放大图片
