· 针对人外周血样本，标准化 MDSC 流式分型应该选择什么指标？
· 小鼠肿瘤浸润髓系细胞，如何精准区分 PMN-MDSC、M-MDSC 两大亚群？
· 是否还可同步检测 T 细胞功能表型：PD-1 标记 T 细胞耗竭、GZMB 评估细胞杀伤能力？
本文依托临床、细胞、动物三重模型，阐释肿瘤胞外囊泡经巨噬细胞介导 MDSC 蓄积、诱发免疫抑制并促进 DLBCL 进展的分子通路，以及巨噬细胞、MDSC、T 细胞三者调控关系。
文献来源：Tumour-Derived Extracellular Vesicles Induce Diffuse Large B-Cell Lymphoma Progression Through Macrophage-Mediated MDSC Accumulation. J Extracell Vesicles.
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一、生物学背景
弥漫大 B 细胞淋巴瘤（DLBCL ）是最常见非霍奇金淋巴瘤，仅 60% 患者经 R-CHOP 获得持续缓解，40% 复发难治，肿瘤微环境（TME）免疫抑制是关键耐药机制。MDSC（髓系来源抑制细胞）、肿瘤相关巨噬细胞（TAM）是 DLBCL 不良预后标志物，但淋巴瘤细胞如何调控巨噬细胞、诱导 MDSC 大量蓄积的分子通路尚不清晰。
本研究通过体内及体外实验发现：肿瘤来源细胞外囊泡以巨噬细胞依赖的方式促进 MDSCs 蓄积；在弥漫大 B 细胞淋巴瘤中，二甲双胍可通过抑制胆固醇生物合成，靶向干预这一病理过程。
二、实验信息
| 具体内容 | |
| 样本类型 | 161例初诊DLBCL患者外周血、A20荷瘤小鼠肿瘤组织及外周血 |
| 检测指标 | 免疫细胞分群：MDSC（Lin⁻HLA-DRlow/⁻CD33⁺CD11b⁺）、CD4⁺T、CD8+T、NK、巨噬细胞、M-MDSC/PMN-MDSC亚型；T细胞功能：PD-1、GZMB、IFN-γ |
| 流式仪器 | BD FACS LSRFortessa X20 |
| 分析软件 | FlowJo（v10.8.1） |
| 数据呈现 | tSNE降维可视化、ROC曲线划分MDSC高低组、Kaplan-Meier生存分析 |
三、配色方案&数据结果说明
配色方案
| 标志物 | 荧光染料 | 标志物简写意义 |
| 核心免疫分群标记（人外周血 / 人肿瘤） | ||
| CD45 | BV510 | 总白细胞 |
| CD3 | BV786 | 总 T 细胞 |
| CD19 | BV711 | B 细胞，Lin 排除 |
| CD56 | PE-Cy7 | NK 细胞，Lin 排除 |
| HLA-DR | PerCP-Cy5.5 | 成熟髓系；MDSC 阴性 |
| CD33 | BV421 | 人 MDSC 核心髓系 |
| CD11b | BV605 | 人 MDSC 核心髓系 |
| CD68 | APC | 巨噬细胞识别标记 |
| T 细胞亚群分型（人） | ||
| CD4 | FITC | 辅助 T 细胞 |
| CD8 | PerCP-Cy5.5 | 细胞毒性 T 细胞 |
| 小鼠 MDSC 细分标记（A20 荷瘤鼠） | ||
| Ly6C | 荧光染料 | M-MDSC（单核型 MDSC） |
| Ly6G | 荧光染料 | PMN-MDSC（多形核 MDSC） |
| T 细胞耗竭 / 杀伤功能标记 | ||
| PD-1 | BV421 | T 细胞耗竭 |
| GZMB（颗粒酶 B） | PE-Cy™7 | T 细胞杀伤功能 |
| IFN-γ | APC | T 细胞活化细胞因子 |
数据结果
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外周血髓系来源抑制细胞（MDSCs）与弥漫大 B 细胞淋巴瘤（DLBCL）肿瘤进展相关
(A) 流式细胞术检测健康对照组（14 例）与弥漫大 B 细胞淋巴瘤（DLBCL）患者组（161 例）外周血中髓系来源抑制细胞（MDSCs）占比
(B) 外周血 MDSCs 高表达组（92 例）与低表达组（69 例）患者的无进展生存期（PFS）及总生存期（OS）分析
(C) 对 DLBCL 患者外周血免疫细胞流式数据进行 tSNE 降维可视化分析
(D) 健康对照组（14 例）与 DLBCL 患者组（161 例）外周血 CD4⁺T 细胞、CD8⁺T 细胞、自然杀伤（NK）细胞占比对比
(E) MDSCs 高表达组（92 例）与低表达组（69 例）患者外周血细胞因子浓度检测结果
(F) DLBCL 患者外周血中 MDSCs 比例与巨噬细胞浸润水平的相关性分析
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高 MDSC 浸润 DLBCL 患者的肿瘤微环境
(A) 外周血 MDSC 高表达患者上调基因的基因集富集分析
(B) 基于转录组测序，外周血 MDSC 占比与肿瘤微环境 MDSC 招募评分的相关性
(C) 外周血 MDSC 高、低表达组上调基因对比（45 例 vs 39 例）
(D) 肿瘤微环境中 MDSC 浸润评分与 IL-1β、IL-6、TNF 表达及中性粒细胞、巨噬细胞浸润程度的相关性
(E) 外周血 MDSC 高表达患者显著上调的标志性信号通路
(F) 外周血 MDSC 高表达患者上调的胞外囊泡分泌相关通路
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二甲双胍抑制肿瘤细胞胆固醇合成，逆转巨噬细胞介导的髓系来源抑制细胞（MDSC）蓄积
(A) 二甲双胍与法托司他汀可抑制LY1细胞中SREBF2、LDLR、HMGCR的表达（每组n=4）
(B) 二甲双胍、法托司他汀降低LY1细胞内胆固醇水平（每组n=4）
(C) 二甲双胍或法托司他汀处理后LY1细胞的总胆固醇含量（每组n=4）
(D、E) 二甲双胍、法托司他汀抑制LY1细胞分泌胞外囊泡（D），并降低LY1细胞来源胞外囊泡的总胆固醇含量（E）（每组n=4）
(F、G) 低胆固醇胞外囊泡抑制巨噬细胞NLRP3与IL-1β活化（F），减少巨噬细胞分泌IL-1β（G）（每组n=4）
(H) 对照组LY1细胞、二甲双胍/法托司他汀处理LY1细胞来源胞外囊泡分别与外周血单个核细胞共培养后，MDSC所占比例（每组n=4）
(I) 上述共培养体系中T细胞表面PD-1的表达水平（每组n=4）
(J) 上述共培养体系中活化CD8⁺T细胞（GZMB⁺CD8⁺T细胞）占比（每组n=4）
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体内实验证实二甲双胍抑制髓系来源抑制细胞（MDSC）浸润并改善肿瘤微环境
(H) 对照组与二甲双胍（100 mg/kg）处理A20小鼠肿瘤内MDSC占比（每组n=5）
(I) 对照组与二甲双胍处理A20小鼠肿瘤内单核型MDSC（M-MDSC）、多形核型MDSC（PMN-MDSC）比例（每组n=5）
(J) 对照组与二甲双胍处理A20小鼠肿瘤CD8⁺T细胞PD-1表达水平（每组n=5）
(K) 对照组与二甲双胍处理A20小鼠肿瘤内GZMB⁺活化CD8⁺T细胞占比
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二甲双胍缓解弥漫大 B 细胞淋巴瘤患者的免疫抑制性肿瘤微环境并改善患者临床预后
(D) 二甲双胍治疗前后患者外周血单个核细胞中MDSC占比（n=4）
(E) 二甲双胍治疗前后患者外周血CD4⁺、CD8⁺T细胞PD-1表达水平（n=4）
(F) 外周血高MDSC水平DLBCL患者生存分析；按治疗方案分为对照组（n=60）与二甲双胍维持治疗组（n=22）
特别推荐
本次解读的来自Journal of Extracellular Vesicles高分文章，构建了 DLBCL 全新免疫抑制调控模型，研究同步在体外、体内及临床试验层面证实二甲双胍可逆转该免疫抑制微环境，为淋巴瘤免疫治疗提供新思路。
原文致谢中，研究团队特别致谢优宁维，感谢我们为本研究提供多色流式免疫分型等关键实验技术支撑。能够深度参与这项前沿课题、登上顶刊致谢，是全体优宁维人的荣幸。未来我们也将持续深耕肿瘤免疫等研究领域，携手更多优秀科研团队产出高质量科研成果。
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参考文献：
Liu M, Dong Y, Guan Q, Wang J, Shi Q, Lin R, Zhang M, Fu D, Cheng S, Xu P, Angeli E, Bousquet G, Cui W, Dou H, Zhao WL, Wang L. Tumour-Derived Extracellular Vesicles Induce Diffuse Large B-Cell Lymphoma Progression Through Macrophage-Mediated MDSC Accumulation. J Extracell Vesicles. 2026 Jun;15(6):e70309. doi: 10.1002/jev2.70309. PMID: 42269122; PMCID: PMC13252908.
