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目前，人类肝癌研究缺乏能够忠实地概括出肝癌的体外模型。
近乎生理的类器官培养系统，人类健康肝细胞在其中形成长期扩展保留肝脏组织功能和遗传稳定性的类器官。
扩展了培养体系三个最常见的PLC传播原发性肝癌(PLC)类器官的过程亚型:肝细胞癌(HCC)，胆管癌(CC)和联合HCC/CC(CHC)肿瘤。
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实验步骤
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组织消化
患者来源或健康的供体标本(0.25-1 cm3)切碎，并在37°C下与消化液(胶原酶切消化)一起孵育30min-1h。而根据患者的程度，将患者自组织的消化过程持续2-5小时至过夜。
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离心
一旦不剩下任何组织，停止消化，然后悬浮通过100μm尼龙细胞过滤器过滤并在300-400g离心5分钟。
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洗涤
不同部分混合并用冷Advanced DMEM/F12洗涤，并在300‒400g的条件下离心5分钟
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细胞接种
将细胞沉淀与Matrigel或还原生长因子BME2混合，每孔将3000‒10,000个细胞接种到48孔/板中。使用非附着使用板。
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培养
基质胶或BME固化后，添加培养液进行培养。培养基基于AdDMEM/F12补充有1% N2和1% B27，1.25mMN乙酰半胱氨酸，10nM胃泌素和生长因子:50ng/mlEGF，10%RSPO1，100ng/mlFGF10，25ng/mlHGF，10mM烟酰胺，5uMA83.01和10uMFSK。
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培养基补充
在分离后的前三天，建立培养基补充25ng/mlNoggin，30%WntCM和10uMY27632
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更换培养基
三天后更换为无Noggin，Wnt，Y27632和hES细胞克隆的培养基。
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冻存
冻存，将培养物解离并与冷冻细胞培养物冷冻，混合培养基并按照标准程序冷冻。在需要的时候，使用标准解冻程序将培养物解冻并进行培养。解冻后的前三天，培养基补充了Y-27632(10mM)。进行生长曲线计算。
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机械分解
10-14天后，从基质胶或BME，机械分解为小片段，然后转移到新基质胶或BME中。每7-10天以1:4‒1:8的分割比例，维持至少6个月。
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换液
换液，每周更换2次，7-10天更换基质胶，维持6个月。
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传代
传代，1:4-1:8传代，弃去培养基，并用预冷的PBS清洗;加预冷的类器官收获液进行BME消化;将类器官处理成碎片;离心类器官;在BME中重悬类器官，在12孔板每个孔内加入一个50-60μm的混合物胶滴。随后将细胞培养板放入37°C细胞培养箱，培养15-25分钟使液滴凝固后，再每孔内加入500μm完全培养基。
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参考文献
P.S.以上实验步骤均来自文献总结，仅供参考
1.Human Primary Liver Cancer -derived Organoid Cultures for disease modelling and drug screening. Nat Med. 2017December ; 23(12): 1424‒1435. doi:10.1038/nm.4438.
2.Oikawa T, et al. Model of fibrolamellar hepatocellular carcinomas reveals striking enrichment in cancer stem cells. Nature Communications. 2015;6:8070.
3.Shamir ER, Ewald AJ. Three-dimensional organotypic culture: experimental models of mammalian biology and disease. Nature reviews Molecular cell biology.
4. Boj SF, et al. Organoid Models of Human and Mouse Ductal Pancreatic Cancer. Cell. 2015;160:324‒338.