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实验步骤
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实验目的
● 建立 OVA - 单核细胞增生李斯特菌感染小鼠模型,为后续 CD8⁺T 细胞免疫应答检测提供基础
● 检测小鼠肝脏中 OVA - 单核细胞增生李斯特菌载量,反映 CD8⁺T 细胞清除细菌的能力
● 检测脾脏中 OVA 特异性 CD8⁺T 细胞,评估其抗原特异性免疫应答
● 检测脾脏 T 细胞的细胞因子表达,评估 CD8⁺T 细胞功能活性
样本来源
8 周龄雌性野生型 C57BL/6N 小鼠
感染及未感染 OVA - 单核细胞增生李斯特菌后 7 天的小鼠肝脏、脾脏
样本处理
感染 OVA - 李斯特菌的小鼠于感染后第 7 天取肝脏制备匀浆并梯度稀释涂布平板检测细菌载量,取脾脏制备单细胞悬液(裂红),通过 Fc 受体封闭、OVA 四聚体及抗体染色后,用流式检测 OVA 特异性 CD8+ T 细胞及其胞内细胞因子表达
实验难度评估
● 研磨脾脏细胞需轻柔避免损伤,红细胞裂解时间不可超过 2min 以防损伤其他细胞;
● 细胞激活(需严格控制 4-6h,超时可能影响细胞状态)和胞内染色步骤