实验步骤
- 1
- 2
- 3
-
实验室耗材
产品名称 品牌 / 型号 用途 BHI 培养基（脑心浸液培养基） Oxoid(Cat# CM1135） 培养 OVA - 单核细胞增生李斯特菌（含 5 mg/mL 红霉素） BHI 平板（含琼脂和红霉素） 自制(Biosharp 琼脂） 细菌涂布培养，检测肝脏细菌载量 无菌匀浆袋 BKMAN(Cat# B-CYD1211） 研磨肝脏 / 脾脏组织，制备单细胞悬液 细胞筛（40μm/70μm） Absin(abs7231/#abs7232） 过滤组织匀浆，分离单细胞（脾脏用 40μm，肝脏用 70μm） 离心管（1.5mL/15mL/50mL） Absin(#abs7119) 细胞离心、洗涤、染色（1.5mL）；组织匀浆（50mL） 96 孔板 Absin(#abs7033) 细菌稀释、细胞激活培养（T 细胞功能检测） 移液器吸头（100μL/1000μL） Rainin(EarthRack™可降解） 细菌悬液移取、细胞染色操作（适配 METTLER TOLEDO 移液器） 培养皿 Absin(#abs7003) 细菌平板培养 尾静脉注射针（胰岛素注射器） 康德莱(U-40） 小鼠尾静脉注射细菌悬液 流式管（5mL） Absin(#abs7303) 流式细胞术染色后样本上机检测 -
试剂与缓冲液
产品名称 品牌 / 型号 用途 红细胞裂解液 Absin(#abs9101)
BD(#555899)
脾脏单细胞悬液去除红细胞（2 分钟裂解） PBS（含 0.2% BSA） Absin(#abs962) 细胞洗涤、重悬，维持细胞活性 7-AAD 死活染色液 BD(#559925) 标记死细胞，排除非活细胞干扰（流式分析） 死活染料 BD(#565388) 固定后死细胞染色（T 细胞功能检测） 细胞刺激阻断剂 BD(#550583) 激活 T 细胞，诱导细胞因子分泌（4 小时刺激）并阻断在胞内便于检测 固定破膜（胞内） BD(#554714) 固定细胞，维持抗原结构（胞内染色前处理）；增加细胞膜通透性，允许胞内抗体进入（IFN-γ、GzmB 等染色） H-2Kb OVA 四聚体 - PE MBL Life science(TS-5001-1C） 标记 OVA 特异性 CD8⁺ T 细胞（四聚体染色） Laemmli 上样缓冲液（2x/4x） Bio-Rad(Cat# 1610737） 蛋白上样（备用，未直接使用，但同类实验常用） 红霉素溶液 Absin(#abs42017907) 细菌培养选择性抗生素 -
抗体与细胞因子（检测工具）
产品名称 品牌 / 克隆 / 型号 用途 FC阻断剂 STARTER(#S0B0599) 封闭 Fc 受体，减少非特异性结合（流式染色第一步） 抗小鼠 CD8-FITC BD(#561966) 标记 CD8⁺ T 细胞（表面染色） 抗小鼠 CD8-APC BD(#561093) 标记 CD8⁺ T 细胞（胞内染色用） 抗小鼠 CD44-PE/Cy7 BD(#560569) 标记活化 T 细胞（CD44⁺为活化标志） 抗小鼠 IFN-γ-PE/Cy7 BD(#561040) 检测胞内 IFN-γ（CD8⁺/CD4⁺ T 细胞） 抗小鼠 Granzyme B-PE BD(#561142) 检测胞内颗粒酶 B（CD8⁺ T 细胞杀伤功能标志） 抗小鼠 TNF-α-BV421 BD(#566287) 检测胞内 TNF-α（炎症因子） 抗小鼠 IL-2-PerCP/Cy5.5 BD(#570616) 检测胞内 IL-2（T 细胞增殖标志）