实验步骤
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实验室耗材
产品名称 品牌/型号/货号 用途 BD Vacutainer采血管（K2EDTA） 全血采集 50 mL锥形离心管 Absin(#abs7100) 细胞离心/洗涤 15 mL锥形离心管 Absin(#abs7102) 细胞离心/小体积操作 24孔平底培养板 Absin(#abs7035) CD8 T细胞体外扩增 96孔V型底板 Absin(#abs7038) 效应细胞-靶细胞共培养 无菌真空滤器（0.22 μm） Fisher Scientific #SCGPU05RE 培养基过滤 10 mL移液管 Absin(#abs7053) 液体转移 细胞冻存管 Fisher Scientific #12-565-163N PBMC/CD8 T细胞冻存 冻存容器（Mr. Frosty™） Fisher Scientific #15-350-50 程序降温冻存细胞 -
试剂与缓冲液
产品名称 品牌/型号/货号 用途 无血清培养基 Absin(#abs9772) CD8 T细胞/NK细胞培养 RPMI 1640培养基（无谷氨酰胺） Absin (#abs9484) 靶细胞培养 胎牛血清（FBS） Absin(#abs972) 培养基补充剂 L-谷氨酰胺（200 mM） Absin(#abs9141) 培养基补充剂 青霉素-链霉素（10,000 U/mL） Absin (#abs9244) 抗生素添加剂 人淋巴细胞分离液 Absin(#abs930) PBMC分离密度梯度介质 CellTrace™ Far Red试剂盒 Thermo Fisher #C34572 靶细胞荧光标记（CTFR） GranToxiLux（定制） OncoImmunin #GTL702-8 颗粒酶B活性检测底物 死活染料 OncoImmunin #NFL-1 活/死细胞区分染色 AO/PI染色液（ViaStain™） Absin(#abs9727) 细胞计数与活力检测 细胞冻存培养基（Recovery™） Fisher Scientific #12-648-010 细胞冻存保护 Benzonase核酸酶（>99%） Fisher Scientific #70-664-3 解冻时防止细胞聚集 HEPES缓冲液（1 M） Absin(#abs90052) 缓冲液配制 Biotin-X-NHS（水溶性） Millipore Sigma #203189-50MG 靶细胞表面蛋白生物素化 链霉亲和素（Streptavidin） Absin(#abs44076218) 生物素化靶细胞交联 -
抗体与细胞因子
产品名称 品牌/型号/货号 用途 抗人CD3抗体（纯化） BD(#567108) CD8 T细胞体外刺激（板包被） 抗人CD28抗体（纯化） BD(#555725) CD8 T细胞共刺激（板包被/可溶添加） 生物素化抗人CD3抗体（UCHT1） BD(#555331) 重定向杀伤实验交联 APC-H7抗人CD107a抗体 BD(#561343) 效应细胞脱颗粒检测 BUV395抗人CD8抗体 BD(#563795) CD8 T细胞标记 重组人IL-2（rhIL-2） UA BIOSCIENCE(# UA040108) CD8 T细胞扩增添加剂 CD8+ T细胞分选试剂盒（人） Miltenyi Biotec(#130-096-495) PBMC中CD8 T细胞阴性分选 死细胞去除试剂盒（Dead Cell Removal Kit） Absin(#abs60657) 低活力细胞清除