实验步骤
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杀伤实验体系建立
1、活 / 死细胞染色
效应细胞和靶细胞用 NFL1 染料（1:3000 稀释）染色 15 分钟（37°C），排除死细胞。
2、共培养条件
CD8 T 细胞实验：
● 效应细胞：靶细胞 = 27:1（如 1.08×10⁶效应细胞 : 4×10⁴靶细胞 / 孔）。
● 加入 GranToxiLux 底物（检测 GZB 活性）和生物素化抗 CD3 抗体（触发 TCR 激活）。
NK 细胞实验：
● PBMC 与 K562 按 60:1、30:1、10:1 比例混合，加入 GranToxiLux 底物。
3、脱颗粒检测
● 共培养 45 分钟后，加入 CD107a 抗体（检测脱颗粒），继续孵育 15 分钟。
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流式检测与分析
1、样本处理
细胞用流式染色缓冲液（HBSS + 0.01% BSA + 0.01% NaN₃）洗涤重悬。
2、关键检测参数
检测目标 标记物 靶细胞内 GZB 活性 CTFR⁺ GranToxiLux⁺ CD8 T 细胞脱颗粒 CD8⁺ CD107a⁺ NK 细胞脱颗粒 CD3⁻ CD19⁻ CD56⁺ CD16⁺ CD107a⁺ 3、设门策略
重定向杀伤实验中靶细胞内颗粒酶 B（GZB）传递及活性检测与效应 CD8⁺T 细胞脱颗粒的流式细胞术分析
A、用于分析靶细胞（CTFR⁺）和效应细胞（CTFR⁻CD8⁺T 细胞）的设门策略。
B、左图：靶细胞（L1210-FAS⁻）中 GZB 传递及活性（GranToxiLux⁺）分析的代表性设门策略。右图：健康对照者（n=7）CD8⁺T 细胞的汇总数据。
C、左图：经 CD3 单克隆抗体刺激的 CD8⁺T 细胞脱颗粒（CD107a⁺）分析的代表性设门策略。右图：健康对照者（n=7）CD8⁺T 细胞的汇总数据。
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