实验步骤
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HLA分型与四聚体确认
1、HLA 分型和 PBMC 的四聚体⁺CD8⁺T 细胞染色
● 采用 Illumina 下一代测序技术对 HIV 感染者的 PBMC 样本进行 HLA 分型。
● 对 ART 治疗的 HIV 感染者的 PBMC 进行四聚体染色，在含 Fc 阻断剂的 FACSwash 中孵育，确认可检测到四聚体⁺细胞的供体用于实验。
2、用 GITR-L 包被培养瓶（若使用其他可溶性活性化合物，此步骤可忽略）
● 提前一天用含 10μg/mL GITR-L 的 PBS 包被 75mL 培养瓶，在 37℃和 5% CO₂条件下孵育 12-15h，培养瓶直立放置以支持抗原呈递细胞在底部建立。
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抗原特异性 CD8⁺T 细胞的肽扩增（共13 天）
● 解冻 PBMC，计数后将其重悬，取三分之一 PBMC 与同源肽孵育 1h，之后与未用肽脉冲的三分之二 PBMC 混合，重悬于 RF10+ralt 中。
● 将 PBMC 接种到培养瓶中，在 37℃和 5% CO₂的适当生物安全级实验室中培养 13 天，期间在第 4、7、9 和 11 天进行半换液，补充相关试剂。