2.3 骨髓来源巨噬细胞BMDM的诱导分化

2.2 Monocyte Derived Macrophage 单核细胞的诱导分化 | 3.1 流式即用型Ready to use panel

实验流程workflow

1

细胞接种与培养

1、将分离的骨髓细胞以2×10⁶/ml的浓度接种在含有10%胎牛血清（abs983）、100 U/ml青霉素和100 μg/ml链霉素的IMDM培养基中，同时加入10 ng/ml M-CSF(abs04696)。

2、在第3天更换新鲜的BMDM生长培养基。
2

成熟BMDM评估

第7天，用荧光团偶联抗体染色，通过流式细胞术检测表达CD11b和F4/80的细胞，以此评估成熟BMDM的形成。
3

更换刺激培养基

第7天，成熟BMDM形成后更换为新鲜刺激培养基。
4

细胞极化

与100 ng/ml LPS或含有50 ng/ml IFNγ(abs04127)的100 ng/ml LPS共孵育，细胞向M1极化；与10 ng/ml IL-4(abs04697)和/或10 ng/ml IL-13共孵育，细胞向M2极化。
5

细胞收集与洗涤

用0.05%的胰蛋白酶（abs47048223）将受刺激的细胞从培养皿中分离出来，然后用含有10%胎牛血清的PBS洗涤细胞两次。