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1.1.2 试剂盒提取法

1.1.1 差速离心法 | 1.1.3 线粒体分离和纯化试剂盒法

研究思路:获取高纯度、高活性线粒体(细胞/组织来源),用于后续功能、蛋白、核酸、代谢物检测。全程冰上/4℃操作,控制在1小时内完成,避免破裂和失活。

实验步骤

  • 1
  • 1

    所需试剂、耗材、仪器

    类别

    名称

    货号

    用途

    试剂

    蔗糖

    abs42027828

    缓冲液组分

    Tris-HCl (1M, pH7.4)

    abs9197

    缓冲液组分

    EDTA(乙二胺四乙酸)

    abs47050906

    螯合剂

    PMSF

    abs812852

    蛋白酶抑制剂

    蛋白酶抑制剂

    abs9161

    保护蛋白

    TOM20抗体

    abs146668

    线粒体外膜标志物

    COXIV抗体

    abs158102

    线粒体内膜标志物

    HSP60抗体

    abs171610

    线粒体基质标志物

    GAPDH抗体

    abs132004

    胞浆污染对照

    Histone H3抗体

    abs149720

    细胞核污染对照

    线粒体膜电位检测试剂盒 (JC-1)

    abs50016

    膜电位检测

    组织线粒体分离试剂盒

    abs9344

    从组织提取线粒体

    细胞线粒体分离试剂盒

    abs9343

    从细胞提取线粒体

    血小板线粒体提取试剂盒

    abs50042

    从血小板提取线粒体

    耗材

    离心管:15mL/50mL无酶

    abs7120/abs7121

    匀浆器:玻璃匀浆器,55mL

    Thomas 3431D94

    移液枪:10μL–1000μL单道/8道

    Eppendorf

    培养皿:6cm/10cm

    abs7005/abs7003

    仪器

    高速冷冻离心机

    Eppendorf 5810R

    玻璃匀浆器

    手动/电动

    荧光显微镜

    Olympus BX53

    Western Blot系统

    Bio-Rad Mini-PROTEAN

    超净工作台

    苏州净化SW-CJ-1F

     

    实验流程参照线粒体提取试剂盒说明书!