研究思路:获取高纯度、高活性线粒体(细胞/组织来源),用于后续功能、蛋白、核酸、代谢物检测。全程冰上/4℃操作,控制在1小时内完成,避免破裂和失活。
实验步骤
- 1
-
所需试剂、耗材、仪器
类别
名称
货号
用途
试剂
蔗糖
abs42027828 缓冲液组分
Tris-HCl (1M, pH7.4)
abs9197 缓冲液组分
EDTA(乙二胺四乙酸)
abs47050906 螯合剂
PMSF
abs812852 蛋白酶抑制剂
蛋白酶抑制剂
abs9161 保护蛋白
TOM20抗体
abs146668 线粒体外膜标志物
COXIV抗体
abs158102 线粒体内膜标志物
HSP60抗体
abs171610 线粒体基质标志物
GAPDH抗体
abs132004 胞浆污染对照
Histone H3抗体
abs149720 细胞核污染对照
线粒体膜电位检测试剂盒 (JC-1)
abs50016 膜电位检测
组织线粒体分离试剂盒
abs9344 从组织提取线粒体
细胞线粒体分离试剂盒
abs9343 从细胞提取线粒体
血小板线粒体提取试剂盒
abs50042 从血小板提取线粒体
耗材
离心管:15mL/50mL无酶
匀浆器:玻璃匀浆器,55mL
Thomas 3431D94
移液枪:10μL–1000μL单道/8道
Eppendorf
培养皿:6cm/10cm
仪器
高速冷冻离心机
Eppendorf 5810R
玻璃匀浆器
手动/电动
荧光显微镜
Olympus BX53
Western Blot系统
Bio-Rad Mini-PROTEAN
超净工作台
苏州净化SW-CJ-1F
实验流程参照线粒体提取试剂盒说明书!