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1.1.3 线粒体分离和纯化试剂盒法

1.1.2 试剂盒提取法 | 1.1.4 线粒体分离纯化快速鉴定试剂盒

研究思路:获取高纯度、高活性线粒体(细胞/组织来源),用于后续功能、蛋白、核酸、代谢物检测。全程冰上/4℃操作,控制在1小时内完成,避免破裂和失活。

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5
  • 6
  • 7
  • 1

    样本准备

    冰上操作;组织剪碎,细胞离心收集;PBS 洗涤去除血污与培养基。

  • 2

    组织解离 / 细胞裂解

    1、组织:加入消化液冰上孵育,用gentleMACS进行标准化匀浆。

    2、细胞:加入裂解液,轻柔裂解,保证线粒体完整。

  • 3

    磁珠标记

    裂解上清过30 μm 滤器去除团块;加入AntiTOM22 MicroBeads,2–8℃避光孵育,特异性标记线粒体。

  • 4

    MACS 柱分选

    将 LS 分选柱置于磁场中平衡;上样标记后的匀浆液;磁标记线粒体被柱捕获,未标记杂质流出。

  • 5

    洗涤除杂

    用洗涤缓冲液洗柱 2–3 次,彻底去除胞质、内膜系统、核碎片等污染。

  • 6

    洗脱收集

    将柱子移出磁场,加入洗脱缓冲液,加压洗脱,收集高纯度、高活性线粒体

  • 7

    质控验证

    1、纯度:WB 检测TOM20、COX IV,无 KDEL、PEX1、Histone H3 等污染。

    2、活性:JC1 检测膜电位,柠檬酸合酶活性富集。

    类别

    产品名称

    货号

    适用

    试剂盒

    Mitochondria Isolation Kit, human

    130-094-532

    人细胞 / 组织

    Mitochondria Isolation Kit, mouse tissue

    130-096-946

    小鼠组织

    耗材

    LS Column

    130-042-401

    线粒体分选

    Pre-Separation Filter, 30 μm

    130-041-407

    澄清裂解液

    匀浆仪

    gentleMACS Dissociator

    130-093-235

    组织标准化匀浆