研究思路:获取高纯度、高活性线粒体(细胞/组织来源),用于后续功能、蛋白、核酸、代谢物检测。全程冰上/4℃操作,控制在1小时内完成,避免破裂和失活。
实验步骤
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样本准备
冰上操作;组织剪碎,细胞离心收集;PBS 洗涤去除血污与培养基。
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组织解离 / 细胞裂解
1、组织:加入消化液冰上孵育,用gentleMACS进行标准化匀浆。
2、细胞:加入裂解液,轻柔裂解,保证线粒体完整。
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磁珠标记
裂解上清过30 μm 滤器去除团块;加入AntiTOM22 MicroBeads,2–8℃避光孵育,特异性标记线粒体。
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MACS 柱分选
将 LS 分选柱置于磁场中平衡;上样标记后的匀浆液;磁标记线粒体被柱捕获,未标记杂质流出。
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洗涤除杂
用洗涤缓冲液洗柱 2–3 次,彻底去除胞质、内膜系统、核碎片等污染。
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洗脱收集
将柱子移出磁场,加入洗脱缓冲液,加压洗脱,收集高纯度、高活性线粒体。
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质控验证
1、纯度:WB 检测TOM20、COX IV,无 KDEL、PEX1、Histone H3 等污染。
2、活性:JC1 检测膜电位,柠檬酸合酶活性富集。
类别
产品名称
货号
适用
试剂盒
Mitochondria Isolation Kit, human
130-094-532 人细胞 / 组织
Mitochondria Isolation Kit, mouse tissue
130-096-946 小鼠组织
耗材
LS Column
130-042-401 线粒体分选
Pre-Separation Filter, 30 μm
130-041-407 澄清裂解液
匀浆仪
gentleMACS Dissociator
130-093-235 组织标准化匀浆