研究思路：线粒体是细胞钙库，钙超载触发膜通透性转换孔（mPTP）开放、细胞死亡，常用Rhod-2 AM（线粒体钙）、Fluo-4 AM（胞浆钙）检测。
实验步骤
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实验流程（Rhod-2 AM，共聚焦）
1、细胞接种：共聚焦小皿，密度70%，处理后，预冷PBS洗2次。
2、染色：Rhod-2 AM工作液（5μM，含0.02% Pluronic F-127），37℃避光孵育30min，PBS洗3次。
3、成像：共聚焦显微镜，激发552nm，发射576nm，实时监测线粒体钙浓度变化（荧光强度越高，钙含量越高）。
4、mPTP检测：CoCl₂（100μM，阳性对照）处理，观察荧光淬灭（mPTP开放，钙外流）。
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所需试剂、耗材、仪器（扩充）
类别
名称
货号
用途
试剂
Rhod-2 AM
abs47045183 线粒体钙离子探针
Fluo-4 AM
abs47014952 胞浆钙离子探针
Pluronic F-127
abs42155849 增强染料的分散性
耗材
共聚焦小皿
离心管：15mL/50mL无酶
仪器
激光共聚焦
Zeiss LSM880