研究思路：mtDNA编码13个ETC蛋白，突变导致线粒体病、衰老、癌症，表观修饰（甲基化、羟甲基化）调控mtDNA转录，单细胞水平解析mtDNA异质性。
实验步骤
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实验流程
1、线粒体分离：按“第一部分”提取高纯度线粒体，避免核DNA污染。
2、mtDNA提取：线粒体沉淀加mtDNA提取缓冲液（50mM Tris-HCl pH8.0、10mM EDTA、1% SDS、200μg/mL蛋白酶K），55℃孵育1h，酚-氯仿抽提，乙醇沉淀，TE溶解。
3、突变检测：
a）一代测序：PCR扩增mtDNA全长（16.5kb），引物覆盖全部编码区/非编码区，Sanger测序比对参考序列（NC_012920）。
b）二代测序（NGS）：mtDNA捕获测序，检测低丰度突变（异质性），分析突变负荷。