研究思路：MAMs是线粒体与内质网（ER）紧密接触区域（10-30nm），调控钙传递、脂质合成、自噬、凋亡，检测MAMs标志物、共定位、钙信号、脂质含量。
实验步骤
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实验流程
1、MAMs分离（差速离心+密度梯度）
细胞匀浆→600g离心（核沉淀）→1500g离心（大碎片）→12000g离心（粗线粒体）→25000g离心（ER沉淀）→粗线粒体与ER沉淀混合→蔗糖密度梯度（15%/30%/45%）离心→MAMs富集层（30-45%界面）。
2、标志物检测：Western Blot检测MAMs标志物（IP3R3、GRP78、VAPB、MFN2），免疫荧光检测IP3R3（ER）与TOM20（线粒体）共定位。
3、钙信号检测：Fluo-4 AM（胞浆钙）、Rhod-2 AM（线粒体钙），共聚焦实时监测ER→线粒体钙传递速率。